Immunologisk forskning innen urologi

Tilordning av et immunogram til en urologisk pasient betyr at den behandlende legen antar tilstedeværelsen av forstyrrelser i immunsystemet. Duplikat bakterielle, virale, sopp-infeksjoner, allergiske reaksjoner, kan være systemiske sykdommer symptomer på disse lidelser, som er karakterisert ved et antall av syndromer (infeksjon, kreft, allergisk, autoimmun, lymfoproliferative). En pasient kan ha flere syndromer. For eksempel kan kroniske infeksjonssykdommer (infeksiøs syndrom) forårsaker immunsvikt og immunsvikt kan manifesteres predisposisjon for infeksjonssykdommer og kreft (Cancer Syndrome). Predisponering mot infeksjoner kan forekomme mot en bakgrunn av sekundær immundefekt, som utviklet som et resultat av en lymfoproliferativ sykdom, for eksempel leukemi. Det er tre hovedgrupper av patologiske forandringer i immunforsvaret:

• den kvantitative eller funksjonelle mangel på en eller annen immunforsvar, som fører til utvikling av en immunsviktstilstand;
• et brudd på anerkjennelsen av antigenet av immunsystemet, som fører til utvikling av autoimmune prosesser;
• hyperreaktiv eller "pervertert" immunrespons, manifestert av utvikling av allergiske sykdommer.

Det er screening (tester av nivå 1) og kvalifiserende (tester av 2 nivå) metoder for immunodiagnostikk. Den førstnevnte eksisterer for å fikse brudd i immunforsvaret, sistnevnte - å etablere mekanismene som er involvert i implementeringen av dem med henblikk på ytterligere immunkorreksjon.

B-Cellular link av immunitet

Screening metoder

• Bestemmelse av den relative og absolutte antall av B-lymfocytter via immunfluorescens eller strømningscytometri ved anvendelse av monoklonale antistoffer til B-celleantigener (CD19, CD20, karakterisert ved at CD - klynge av differensiering). B-lymfocyttinnholdet er normalt hos voksne: 8-19% av totalt antall leukocytter eller 190-380 celler / μl. Økning av innholdet av B-lymfocytter oppstår i akutte og kroniske bakterie- og soppinfeksjoner, kronisk leversykdom, systemisk bindevevssykdommer, kronisk lymfatisk leukemi, multippelt myelom.
• Bestemmelse av konsentrasjonen av immunglobuliner nespespetsificheskih (F, M, G, E) ved enkel radial immunodiffusjon, eller turbometrii nefelometri, radioimmunanalyse eller enzymimmunoanalyse (EIA). Norm for voksne: immunoglobulin (Ig) En 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. En økning i konsentrasjonen av immunglobuliner skjer med de samme patologiske forholdene der en økning i innholdet av B-lymfocytter oppstår. Redusere konsentrasjonen av immunglobuliner er i medfødt hypogammaglobulinemi, tumorer i immunsystemet, fjerning av milten, proteintapet, i sykdommer i nyrene eller tarmene, behandling med cytostatika og immunodepreesantami.

Angi metoder

• Bestemmelse av sirkulerende immunkomplekser i blodet ved selektiv utfelling i polysilenglykol etterfulgt av spektrofotometrisk tetthetstesting (normalt 80-20 UE). Økningen av sirkulerende immunkomplekser er karakteristisk for akutte bakterielle, sopp, virusinfeksjoner, autoimmune, immunokompleks sykdommer, serumsykdom, allergiske reaksjoner av type 3;
• Bestemmelse av spesifikke immunglobuliner i blod i forhold til bakterielle og virale antigener, deoksyribonukleinsyre (DNA) i autoimmune sykdommer, identifisering av sæd (autoimmun infertilitet) og protivopochechnyh antistoffer (pyelonefritt og glomerulonefritt) ved radial immunodiffusjon eller ELISA.
• Bestemmelse av antisperm-antistoffer i sperma [MAR-test (blandet antiglobulinreaksjon)], normen er negativ.
• Bestemmelse av konsentrasjonen av immunoglobuliner i urin med det formål å differensialdiagnose mellom pyelonefrit og glomerulonefritis (selektivitet av proteinuri).
• Bestemmelse av IgE i prostatajuice for diagnose av allergisk prostatitt ved radial immunodiffusjon eller ELISA. 
• Forskning i respons blasttransformation reaksjon av lymfocytter B på B-celle-mitogen (kermesbær mitogen for stimulering av blasttransformation omsetning av B-lymfocytt, i nærvær av T-lymfocytter), karakterisert ved at den standard verdi på 95 til 100%.

T-celle link av immunitet

Screening metoder

• Bestemmelse av den relative og absolutte antall CD3 modne T-lymfocytt-reaksjon ved immunofluorescens eller flyte-metri under anvendelse av anti-SDZ monoklonale antistoffer. Normen for voksne er 58-76% eller 1100-1700 celler / μl. Reduksjon i antall T-lymfocytter er en indikator på mangelen på den cellulære lenken av immunitet. Dette er karakteristisk for en rekke sekundære og primære immun (kroniske bakterie- og virusinfeksjoner: tuberkulose, ervervet immunsvikt syndrom, kreft, kronisk nyresvikt, traume, stress, aldring, underernæring, behandling med cytotoksiske medikamenter, ioniserende stråling). En økning i antall T-lymfocytter forekommer mot en bakgrunn av hyperaktivitet av immunitet eller i lymfoproliferative sykdommer. Med betennelse øker antall T-lymfocytter først, og senker deretter. Fravær av en reduksjon i T-lymfocytter antyder kroniseringen av den inflammatoriske prosessen.
• Vurdering av subpopulasjoner av lymfocytter.
  • Bestemmelse av antall T-hjelpere (anti-CD4 antistoff). Normalt vil 36-55% eller 400-1100 celler / μl. Økning av antallet av disse cellene skjer i autoimmun sykdom, Waldenstrøms sykdom, aktivering av immunsystemet antitransplantatsionnogo; reduksjon i antallet av T-hjelperceller forekommer i kroniske bakterielle, virale protozoinfeksjoner, tuberkulose, ervervet immunsviktsyndrom, maligniteter, brannskader, traume, underernæring, aldring, cytostatika behandling, ioniserende stråling.
  • Bestemmelse av antall T-suppressorer (anti-CD4 antistoff). Normalt vil 17-37% eller 300-700 celler / μl. En økning i antall T-suppressorer skjer med de samme forholdene hvor antall T-hjelpere reduseres, og deres reduksjon på samme betingelser når innholdet i T-hjelpere stiger.
  • Immunoregulatorisk indeks CD4 / CD8, i normen 1,5-2,5. Hyperaktivitet ved frekvenser over 2,5 (allergiske og autoimmune sykdommer); hypoaktivitet - mindre enn 1,0 (predisponering for kroniske infeksjoner). Ved begynnelsen av den inflammatoriske prosessen stiger immunoregulatorisk indeks, og når den senker, normaliserer den.

Angi metoder

• Bestemmelse av antall naturlige drepere (NK-celler) - anti-CD16 og anti-CD56-antistoffer. Normen for CD 16-lymfocytter er 6-26%, CD56 - 9-19%. Økning av antallet av NK-celler forekommer i podingsforkastelse, avta - i virale infeksjoner, kreft, primær og sekundær immunsvikt, brannskader, traume og stress, behandling med cytostatika og ioniserende stråling. 
• Bestemmelse av antall T-lymfocytter med reseptoren for interleukin-2 (aktiveringsmarkør) - anti-CD25-antistoffer. Normen er 10-15%. En økning i antallet deres observeres i allergiske sykdommer, transplantasjonsavstøtning, respons på tymus-avhengige antigener i den akutte perioden med primær infeksjon, en reduksjon i de samme sykdommene hvor antall NK-celler avtar.
• Undersøkelse av uttrykket for aktiveringsmarkøren - histokompatibilitetsmolekylet i klasse II HLA-DR. Økt uttrykk forekommer i inflammatoriske prosesser, hos pasienter med hepatitt C, cøliaki, syfilis, akutt respiratorisk infeksjon.
• Evaluering av apoptose av lymfocytter. En indikasjon på beredskap av lymfocytt apoptose kan bli identifisert ved deres ekspresjon av overflate Fas-reseptoren (CD95) i mitokondriene og bd-2 protoonkogenet. Apoptose ble evaluert ved behandling lymfocytt to fluorescerende fargestoffer: propidiumjodid, som binder seg til DNA-fragmenter og annexin Y, binding til fosfatidylserin på cellemembranen opptrer i begynnelsen av apoptose. Evaluering av resultatene utføres på et flow-cytofluorimeter. Beregningen av resultater er basert på forholdet mellom celler som er farget med forskjellige farger. Ufargede celler som er levedyktige celler, er forbundet bare med annexin Y, - tidlige tegn på apoptose, med propidiumjodid og annexin I - sene manifestasjoner av apoptose, beising bare propidiumjodid indikerer nekrose.
• Evaluering av proliferasjonen av T-lymfocytter in vitro.
  • Endring i celleblastogenese er en reaksjon av blast-transformasjonen av lymfocytter. Leukocytter inkuberes med noe mitogen av planteopprinnelse (lektiner). Mer vanlig phytohemagglutinin i 72 timer, så smør, flekk det og telle antall blaster! Stimuleringsindeksen er forholdet mellom prosentandelen transformerte celler i forsøket (kultur med fytohemagglutinin) til prosentandelen transformerte celler i kontrollen (kultur uten fytohemagglutinin). Reaksjonen av blasttransformasjonen av lymfocytter kan vurderes ved å inkludere en radioaktiv label (ZN-tymdin) i dyrkede celler, da DNA-syntese øker ved deling av celler. Forstyrrelser i den proliferative responsen forekommer både i primære og sekundære immundefekter forbundet med infeksjoner, onkologiske sykdommer, nyreinsuffisiens og kirurgiske inngrep.
  • Evaluering av disse studiene, ekspresjonen av aktiveringsmarkører (CD25, transferrin reseptor til - CD71) molekyler og MHC klasse II HLA-DR, som i det vesentlige er fraværende på hvilende T-lymfocytter. T-lymfocytter stimulert med fytohemagglutinin etter 3 dager uttrykk aktiveringsmarkører ble analysert ved hjelp av direkte eller indirekte immunofluorescens, strømningscytometri ved anvendelse av monoklonale antistoffer som utskilles reseptorer.
  • Å måle mengden av mediatorer fremstilt ved hjelp av aktiverte T-lymfocytter [interleukin (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gamma-interferon, etc.], ved radioimmunoassay eller ELISA. Spesielt viktig er evalueringen av konsentrasjonen av y-interferon og IL-4 som markører av TH og Th2 i supernatanten av aktiverte kulturer og i cellen. Hvis det er mulig, er det nyttig å bestemme ekspresjonen av genet for den aktuelle cytokin ved nivået av budbringer ribonukleinsyre i treonin produserende celle og reseptorekspresjon intensiteter for de respektive cytokiner.
    
• Reaksjonen av inhibering av migrasjon av lymfocytter. Sensitiserte T-lymfocytter i reaksjonen med antigenfrigivelseslymfokiner, inkludert faktorer. Hemmer migrering av lymfocytter. Fenomenet av inhibering observeres når mitogener blir introdusert i cellens kultur. Evaluering av graden av hemming gjør det mulig å bedømme lymfocytes evne til å frigjøre cytokiner. Vanligvis er hyppigheten av migrasjon, avhengig av det spesifikke mitogen, 20-80%.
• Evaluering av cytotoksisitet av NK-celler. Bestem muligheten til naturlige drepeceller til å drepe målceller av erytromyeloidlinjen K-562. Hvis antistoff-avhengig cytotoksisitet blir evaluert, brukes målceller belagt med IgG-antistoffer. Målceller er merket med 3H-uridin og inkubert med effektorceller. Målcellernes død estimeres fra frigjøringen av den radioaktive etiketten til løsningen. Reduksjon av cytotoksisitet oppstår med ondartede neoplasmer. I noen tilfeller, når en prognose av effektiviteten av behandling med interleukiner er nødvendig, evalueres cytotoxiciteten til NK-celler når de inkuberes med visse cytokiner.

Undersøkelse av funksjonen av fagocytter

Screening metoder

Undersøkelse av absorpsjon av mikrobielle celler med fagocytter (fagocytose av latexpartikler, testkultur av stafylokokker, Escherichia coli eller mikroorganismer isolert fra pasienten). Ved sentrifugering av det hepariniserte blodet isoleres en suspensjon av leukocytter, serum av IV-blodgruppen blir tilsatt for opsonisering (opsoniner er proteiner som forsterker fagocytose). Den mikrobielle suspensjonen fortynnes, blandes med leukocytter og inkuberes i 120 minutter, prøvetaking for analyse etter 30,90,120 min etter begynnelsen av inkuberingen. Av de valgte leukocyt-suspensjonene utgjør smør. Bestem følgende indikatorer for fagocytose:

• fagocytisk indeks - prosentandelen celler som gikk inn i fagocytose i 30 min og 120 min inkubasjon; normativ verdi av fagocytisk indeks (30) 94% av fagocytisk indeks (120) - 92%;
• fagocytisk antall - gjennomsnittlig antall bakterier som er intracellulære; Den normative verdien av fagocytisk nummer (30) 11%, fagocytisk nummer (120) - 9,8%;  
• koeffisient av fagocytisk antall - forholdet mellom fagocytisk nummer (30) og fagocytisk nummer (120); normal 1,16;
• Den bakteriedrepende indeksen for nøytrofiler er forholdet mellom antall mikrober som er drept inne i fagocytene til det totale antall mikrober tatt opp; i normen på 66%.

Angi metoder

• Undersøkelse av den baktericide aktivitet av fagocytter i testen med nitrosintetrazolium (NST) er NST-testen. Til leukocytene blir fargestoff av nitrous tetrazoliumgult tilsatt. Når fargestoffet absorberes av nøytrofilen, finner reduksjonsprosessen sted under påvirkning av frie radikaler av oksygen, hvilket resulterer i en blå farging. Reaksjonen utføres i en 96-brønn flatbunnplate. I de tre første brønnene med en blanding av HCT og leukocytter blir Hanks-løsning (spontan HCT) tilsatt, i sistnevnte latexpartikler; inkuber ved 37 ° C i 25 minutter. Resultatene leses ved 540 nm på leseren og uttrykkes i konvensjonelle enheter. Beregn stimuleringsfaktoren ( _Kst ), lik forholdet mellom optisk tetthet i de stimulerte brønnene og den gjennomsnittlige optiske tettheten i brønnene uten stimulering. Hos friske mennesker, _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1,78 ± 0,36.
• Undersøkelse av adhesjonsmolekyler. Ved hjelp av strømningscytofluorimetri bestemmes ekspresjonen av overflateantigener CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18. Immundefekter med krenkelse av vedheft manifesteres ved tilbakevendende infeksjoner, langsom helbredelse av sår og fravær av pus i smittefokus.

Undersøkelse av komplementsystemet

Screening metoder

Bestemmelse av hemolytisk aktivitet av komplement - en studie av den klassiske vei for komplementaktivering. Forskjellige fortynninger av serum fra pasienten og en sunn person blir tilsatt erytrocytene til et sau belagt med antistoffer. En enhet av hemolytisk aktivitet er tatt som omvendt av fortynning av serum, hvor 50% av erytrocytene er ødelagt. Graden av hemolyse evalueres fotometrisk ved utbyttet av hemoglobin i oppløsningen. Reduksjon av hemolytisk aktivitet av komplement observeres i systemisk lupus erythematosus med nyre involvering, akutt glomerulonephritis. Kombinerte immundefekter, myasthenia gravis, viral hepatitt, lymfomer, økning - med obstruktiv gulsot, thyroiditt Hashimoto. Reumatisme, revmatoid artritt, nodulær periarteritt. Dermatomyosit, myokardinfarkt, ulcerøs kolitt, Reiter syndrom, gikt.

Angi metoder

• Bestemmelse av komplementkomponenter. Den kvantitative bestemmelsen utføres ved metoden for radial immunodiffusjon og nephelometri.
  Studien er ikke informativ, med mindre de antigeniske egenskapene til komplementkomponenter endres.
• Det ble funnet at Clq-komponenten av komplement forsterker fagocytose og medierer cellulær cytotoksisitet. Dens reduksjon forekommer i sykdommer i immunkomplekser, systemisk lupus erythematosus, purulente infeksjoner og svulster.
• C3-komponenten deltar i aktiveringen av den klassiske og alternative komplementbanen. Reduksjon av konsentrasjonen er forbundet med kroniske bakterielle og soppinfeksjoner, forekomsten av sirkulerende eller vevsimmunkomplekser.
• C4-komponenten deltar i aktiveringen av den klassiske banen. En reduksjon av konsentrasjonen er forbundet med en langvarig aktivering av komplement med immunkomplekser og en reduksjon av konsentrasjonen av C1-inhibitoren, som styrer aktiveringen av den klassiske komplementvei. C4-mangel oppstår med systemisk lupus erythematosus, forekommer en økning i C4 med nyresykdom, transplantasjonsavvisning, akutt betennelse og sykdommer i mage-tarmkanalen.
• C5a er et lite fragment av C5-molekylet, splittet fra det som et resultat av aktivering av komplement-systemet. Økningen i konsentrasjonen oppstår med betennelse, sepsis, atopisk og allergisk sykdom.
• Cl-inhibitoren er en multifunksjonsfaktor. Det styrer aktiveringen av C1-komponenten av komplement, hemmer aktiviteten til kallikrein, plasmin og aktivert faktor Hageman, proteaser Cls og Or. Mangel på C1-hemmer fører til angioødem.
• komplementære studier. Til standardserum mangler noen komplementkomponent, blir testserum tilsatt og komplementets hemolytiske aktivitet bestemt. Hvis den hemolytiske aktiviteten ikke gjenopprettes til normal, antas det at aktiviteten til denne komplementkomponenten i testserumet er redusert.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]