Konfokal intravital mikroskopi av hornhinnen

Konfonal mikroskopi av hornhinnen er en av de moderne undersøkelsesmetodene; tillater å gjennomføre intravital overvåking av hornhinnestatusen med visualisering av vev på det cellulære og mikrostrukturelle nivået.

Denne metoden, på grunn av den opprinnelige utformingen av mikroskopet og dens høye oppløsning, gjør det mulig å visualisere levende hornhinnevev, å måle tykkelsen til hvert av lagene, og å vurdere graden av morfologiske forstyrrelser.

Formålet med konfokal mikroskopi av hornhinnen

Karakteriserer de morfologiske endringene i hornhinnen, som skyldes ulike inflammatoriske og dystrofiske sykdommer, samt fra kirurgiske inngrep og virkningen av CR.

Morfologiske data er nødvendig for å vurdere alvorlighetsgraden av den patologiske prosessen, effektiviteten av behandlingen og bestemme pasientens taktikk.

Indikasjoner for prosedyren

• Inflammatoriske sykdommer i hornhinnen ( keratitt ).
• Dystrofiske sykdommer i hornhinnen ( keratokonus, Fuchs dystrofi, etc.).
• Syndrom av "tørt øye".
• Betingelser etter kirurgiske inngrep på hornhinnen (gjennom hornhindetransplantasjon, keratorfraktive operasjoner).
• Forhold knyttet til bruk av kontaktlinser.

[1], [2], [3], [4]

Forberedelse

Denne studien er mulig uten bruk av anestetika. En dråpe nedsenkningsvæske er plassert på linsen i det konfokale mikroskoplinsen. Dette eliminerer linsens direkte kontakt med hornhinnen og minimerer risikoen for epitelskader.

[5], [6], [7], [8], [9],

Teknikk konfokal mikroskopi av hornhinnen

Studien utføres på et konfokalt mikroskop ConfoScan 4 (Nider) med en økning på 500 ganger. Enheten lar deg undersøke hornhinnen over hele tykkelsen.

Størrelsen på undersøkt sone er 440 × 330 μm, tykkelsen på skannelaget er 5 μm. Et objektiv med en dråpe gel blir ført til hornhinnen for å berøre og sette slik at tykkelsen på det nedsenkende væskelaget er 2 mm. Enhetsdesignet lar deg undersøke hornhinnen i den sentrale sonen og dens paracentrale områder.

Kontraindikasjoner til prosedyren

Relativ kontraindikasjon markerte irritasjon av øyet mot bakgrunn av en akutt inflammatorisk prosess.

[10], [11]

Normal ytelse

Normal morfologisk bilde av hornhinnen

Den fremre epitel består av 5-6 lag celler. Gjennomsnittlig tykkelse på hele epitelet er ca. 50 μm. I følge den morfologiske strukturen er følgende lag skilt ut (fra innsiden utover): basal, subulat og overfladisk.

• Det innerste (basale) lag er representert av små tette sylindriske celler uten synlig kjerne. Den basale celle grenser er klare, lyse.
• Mellomlaget består av 2-3 lag med ryggradsformede (bevingede) celler med dype invaginasjoner, i hvilke utvoksninger av nabostatenes celler er bygget. Mikroskopisk er cellegrensene ganske godt skillebare, og kjernene kan ikke defineres eller være uklar.
• Overflatet av epitelet er representert av ett eller to lag polygonale celler med klare grenser og en homogen tetthet. Kjernene er vanligvis lysere enn cytoplasmaet, hvor man også kan skille mellom en mørk ring i nær-nuklear.

Blant cellene i overflatelaget skiller mellom mørkt og lys. Den økte reflektiviteten av epitelceller indikerer en nedgang i nivået av metabolisme i dem og begynnelsen av deres desquamation.

Bowman-membranen er en gjennomsiktig struktur som ikke reflekterer lys, så det er umulig å visualisere det når konfokal mikroskopi utføres.

Subbasic nerve plexus ligger under Bowman membranen. Normalt ser nervefibrene ut som lyse striper som går parallelt på en mørk bakgrunn, og kontakter hverandre. Reflektivitet (reflektivitet) kan være ujevn i fiberlengde.

Stroma i hornhinnen opptar 80 til 90% av hornhinnenes tykkelse og består av en cellulær og ekstracellulær komponent. De grunnleggende cellulære elementene i stroma er keratocytter; utgjør omtrent 5% av volumet.

Et typisk mikroskopisk mønster av stroma inkluderer flere lyse uregelmessige ovalformede kropper (keratocytkjerner) som ligger i tykkelsen på en gjennomsiktig mørk grå eller svart matrise. Normalt er visualisering av ekstracellulære strukturer umulig på grunn av deres gjennomsiktighet. Stroma kan deles betinget i underlag: anterior (lokalisert direkte under Bowman membranen og utgjør 10% av tykkelsen av stroma), fremre, mellom og bakre.

Den gjennomsnittlige tettheten av keratocytter er høyere i fremre stroma, gradvis reduseres antallet deres mot bakre lag. Tettheten av cellene i den fremre stroma er nesten dobbelt så stor som for cellene i den bakre stroma (dersom densiteten av cellene i fremre stroma er tatt som 100%, så er densiteten av cellene i den bakre stroma ca. 53,7%). I den fremre stroma har kjernene av keratocytter en rund bønneformet form, og i den bakre ovalen og mer langstrakt.

Kjernene av keratocytter kan variere i lysstyrke. Den ulike evne til å reflektere lys avhenger av deres metabolske tilstand. Lysere celler anses å være aktiverte keratocytter ("stressceller"), hvis aktiviteter er rettet mot å opprettholde intern hornhindehemostase. I normen og synsfeltet er det enkeltaktiverte celler.

Nervefibre i hornhinnenes fremre stroma er visualisert som lyse homogene bånd, som ofte danner bifurkasjoner.

Neddemembranen er normalt gjennomsiktig og er ikke visualisert ved konfokal mikroskopi.

Det bakre epitelet er et monolag av sekskantede eller polygonale flate celler med en jevnt lys overflate mot en bakgrunn av forskjellige mørke intercellulære grenser.

Enheten gir mulighet for manuell eller automatisk beregning av celletetthet, deres område og variabilitetskoeffisient.

Patologiske endringer i hornhinnenes struktur

Keratokonus er preget av signifikante endringer i hornhinnenes anteriorepitel og stroma.

[12], [13], [14], [15], [16], [17], [18], [19], [20]