Konfokal levetidsmikroskopi av hornhinnen

Konfokalmikroskopi av hornhinnen er en av de moderne forskningsmetodene; den muliggjør intravital overvåking av hornhinnen med vevsvisualisering på celle- og mikrostrukturnivå.

Denne metoden, på grunn av mikroskopets originale design og høye oppløsningsevne, tillater visualisering av levende hornhinnevev, måling av tykkelsen på hvert av lagene og vurdering av graden av morfologiske forstyrrelser.

Formålet med hornhinnekonfokalmikroskopi

Å karakterisere de morfologiske endringene i hornhinnen som oppstår ved ulike inflammatoriske og dystrofiske sykdommer, samt som et resultat av kirurgiske inngrep og eksponering for CL.

Morfologiske undersøkelsesdata er nødvendige for å vurdere alvorlighetsgraden av den patologiske prosessen, effektiviteten av behandlingen og for å bestemme taktikken for pasientbehandling.

Indikasjoner for prosedyren

• Inflammatoriske sykdommer i hornhinnen ( keratitt ).
• Dystrofiske sykdommer i hornhinnen ( keratokonus, Fuchs dystrofi, etc.).
• Tørre øyne-syndrom.
• Tilstander etter kirurgiske inngrep på hornhinnen (penetrerende hornhinnetransplantasjon, keratorefraktiv kirurgi).
• Tilstander forbundet med bruk av kontaktlinser.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Forberedelse

Denne undersøkelsen kan utføres uten bruk av bedøvelse. En dråpe immersjonsvæske plasseres på objektivlinsen til konfokalmikroskopet. Dette eliminerer direkte kontakt mellom linsen og hornhinnen og minimerer risikoen for skade på epitelet.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Teknikk konfokalmikroskopi av hornhinnen

Studien utføres ved hjelp av et ConfoScan 4 (Nider) konfokalmikroskop med en forstørrelse på 500 ganger. Apparatet gjør det mulig å undersøke hornhinnen i hele dens tykkelse.

Størrelsen på det undersøkte området er 440 × 330 μm, tykkelsen på skannelaget er 5 μm. Linsen med en dråpe gel føres mot hornhinnen til den berører og installeres slik at tykkelsen på det nedsenkende væskelaget er 2 mm. Apparatets design gjør det mulig å undersøke hornhinnen i den sentrale sonen og dens parasentrale områder.

Kontraindikasjoner til prosedyren

En relativ kontraindikasjon er alvorlig øyeirritasjon på grunn av en akutt betennelsesprosess.

[ 10 ], [ 11 ]

Normal ytelse

Normalt morfologisk bilde av hornhinnen

Det fremre epitelet består av 5–6 cellelag. Den gjennomsnittlige tykkelsen på hele epitelet er omtrent 50 µm. I henhold til den morfologiske strukturen skilles følgende lag (fra innsiden og ut): basale, sylformede celler og overfladiske.

• Det innerste (basale) laget er representert av små, tette, sylindriske celler uten synlig cellekjerne. Grensene til basalcellene er klare og lyse.
• Mellomlaget består av 2–3 lag med piggete (vingede) celler med dype invaginasjoner der utvekster fra naboceller er innebygd. Mikroskopisk er cellegrensene ganske tydelig å skille, og kjernene er kanskje ikke definerte eller kan være uklare.
• Det overfladiske laget av epitelet er representert av ett eller to lag med polygonale celler med klare grenser og homogen tetthet. Kjernene er vanligvis lysere enn cytoplasmaet, hvor en perinukleær mørk ring også kan skilles ut.

Blant cellene i det overfladiske laget skilles mørke og lyse celler. Økt refleksjonsevne i epitelcellene indikerer en reduksjon i stoffskiftet og en begynnende avskalling.

Bowmans membran er en gjennomsiktig struktur som ikke reflekterer lys, så det er normalt umulig å visualisere den med konfokalmikroskopi.

Den subbasale nerveplexusen ligger under Bowmans membran. Normalt fremstår nervefibrene som lyse striper som går parallelt på en mørk bakgrunn og berører hverandre. Refleksjonsevnen (refleksjonsevnen) kan være ujevn langs fiberen.

Hornhinnens stroma opptar 80 til 90 % av hornhinnens tykkelse og består av cellulære og ekstracellulære komponenter. De viktigste cellulære elementene i stroma er keratocytter; de utgjør omtrent 5 % av volumet.

Et typisk mikroskopisk bilde av stroma inkluderer flere lyse, uregelmessige, ovale legemer (keratocyttkjerner) som ligger i tykkelsen av en gjennomsiktig mørkegrå eller svart matrise. Normalt er visualisering av ekstracellulære strukturer umulig på grunn av deres gjennomsiktighet. Stroma kan betinget deles inn i underlag: anterior (som ligger rett under Bowmans membran og utgjør 10 % av stromatykkelsen), anterior-midtre, midtre og posterior.

Den gjennomsnittlige tettheten av keratocytter er høyere i det fremre stroma, og avtar gradvis mot de bakre lagene. Tettheten av fremre stromale celler er nesten dobbelt så høy som for bakre stromale celler (hvis tettheten av fremre stromale celler tas som 100 %, vil tettheten av bakre stromale celler være omtrent 53,7 %). I det fremre stroma har keratocyttkjernene en avrundet bønneformet form, mens de i det bakre stroma er ovale og mer langstrakte.

Keratocyttkjerner kan variere i lysstyrke. Den ulik evnen til å reflektere lys avhenger av deres metabolske tilstand. Lysere celler regnes som aktiverte keratocytter ("stressceller"), hvis aktivitet er rettet mot å opprettholde hornhinnens indre homeostase. I norm- og synsfeltet finnes enkeltstående aktiverte celler.

Nervefibre i det fremre hornhinnestroma visualiseres som lyse homogene bånd, som ofte danner bifurkasjoner.

Descemets membran er normalt gjennomsiktig og visualiseres ikke ved konfokalmikroskopi.

Det bakre epitelet er et monolag av sekskantede eller polygonale flate celler med en jevnt lys overflate mot en bakgrunn av klare mørke intercellulære grenser.

Enheten har muligheten til å beregne celletetthet, areal og variasjonskoeffisient manuelt eller automatisk.

Patologiske endringer i hornhinnens struktur

Keratokonus er preget av betydelige forandringer i hornhinnens fremre epitel og stroma.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]