13c urease-test: forberedelse, resultater, positiv, negativ

Siden oppdagelsen av Helicobacter pylori-bakterien assosiert med kronisk gastritt og magesår og tolvfingertarmsår, har det blitt utviklet diagnostiske metoder, inkludert ureasetesten, som gjør det mulig å oppdage disse mikroorganismene hos en spesifikk pasient, bekrefte deres involvering i utviklingen av mage-tarmsykdommer og foreskrive effektiv behandling.

Ureaseenzym som biomarkør for Helicobacter-infeksjon

H. pylori-bakterier beskytter seg mot det sure miljøet i magesekkens lumen på to måter. For det første, ved å skade slimhinnen med flagellene sine, når mikroorganismene de nedre lagene, helt ned til epitelcellene, hvor pH-verdien er høyere (dvs. surhetsgraden er lavere). For det andre nøytraliserer bakteriene syren ved å syntetisere store mengder av det katalytisk aktive høymolekylære metalloenzymet urease eller urea-amidohydrolase.

Bruken av urease i diagnosen av Helicobacter er mulig ikke bare på grunn av den cytoplasmatiske aktiviteten til dette enzymet, men også på grunn av ekstern interaksjon med vertsceller.

Under påvirkning av urease skjer nedbrytningen av magesyre til hydrogennitrid (ammoniakk) og karbondioksid (karbondioksid). De reagerer med saltsyre i magesaften og danner en sone med nøytral surhet rundt H. pylori, og støtter også metabolismen til bakterieceller.

Derfor er urease den viktigste faktoren i koloniseringen av H. pylori i den menneskelige mageslimhinnen, og påvisning av ureolytisk aktivitet regnes som en biomarkør for virulensen til denne bakterien, som gastroenterologer – ved å utføre en ureasetest – bruker til å diagnostisere Helicobacter-infeksjon, samt til å overvåke resultatene av medikamentindusert ødeleggelse (utryddelse) av bakterier.

H. pylori-diagnostikk inkluderer invasive og ikke-invasive tester – avhengig av om endoskopisk undersøkelse av magen (fibrogastroduodenoskopi) er nødvendig eller ikke. Den invasive testen er hurtigureasetest eller ekspressureasetest (RUT-test), som krever at man tar vevsprøver (biopsi). 13C-urea-pustetest (13C-UBT) er den vanligste ikke-invasive testen.

Det skal bemerkes at ikke-invasiv diagnostikk av H.pylori kan utføres ved hjelp av en blodprøve for antistoffer (spesifisitet på 75 %, sensitivitet - 84 %), urin-ELISA (med en sensitivitet på 96 % og spesifisitet på 79 %) og et koprogram for bakterielle antigener. Mer informasjon - Helicobacter pylori-infeksjon: antistoffer mot Helicobacter pylori i blodet

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Indikasjoner for prosedyren urease-test

Kolonisering av mageslimhinnen av H. pylori er i seg selv ikke en sykdom; det er en faktor i økt bakteriell belastning på kroppen, som under visse forhold kan utløse utviklingen av en rekke patologier i magesekken og øvre mage-tarmkanal.

Indikasjoner for diagnostikk av Helicobacter-infeksjon, spesielt ureasetest, er assosiert med gastritt med økt surhetsgrad, antral og atrofisk gastritt, duodenitt, magesår og duodenalsår, gastrisk MALT-lymfom. Etter endoskopisk reseksjon av magekreft i tidlig stadium kan en histologisk undersøkelse utføres i kombinasjon med en hurtig ureasetest - FGDS med ureasetest.

Gastroenterologer kan foreskrive en ureasetest hvis pasienter klager over en følelse av tyngde og ubehag i den epigastriske regionen, hyppig halsbrann etter å ha spist, sur eller råtten raping, bitterhet i munnen, kvalme, tarmlidelser, verkende eller krampende smerter i magen.

[ 8 ], [ 9 ]

Forberedelse

Forberedelsen til 13C urea-pustetesten består av at pasienten slutter å: ta antibiotika 4 uker før testen, og NSAIDs, protonpumpehemmere (reduserer magesyre) og syrenøytraliserende midler eller adsorbenter brukt mot halsbrann - minst to uker før. Inntak av medisiner bør stoppes fem til seks dager, og drikke alkohol og røyking - tre dager før testen.

Det anbefales også å unngå å spise belgfrukter i omtrent en uke før testing, ettersom bønner, erter, linser, soyabønner og bønner inneholder urease (som beskytter planter mot sykdommer og skadedyr).

Kvelden før testen er en sen, tung middag kontraindisert; på testdagen bør du utføre normal munnhygiene, og halvannen time før testen bør du ikke drikke noe eller bruke tyggegummi.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Teknikk urease-test

Implementeringsteknikk:

• Først tas en grunnleggende pusteprøve - en utånding gjøres i en myk plastbeholder (og hermetisk forseglet);
• væske med tilsatt 13C-urea tas oralt;
• Etter 25–30 minutter tas en ny prøve av utåndet luft over i en annen beholder.

Prøvene som er innhentet på denne måten analyseres på et massespektrometer med separasjon av isotoper i en andre prøve og bestemmelse av konsentrasjonen deres. Forskjellen mellom verdiene i den andre og første prøven uttrykkes som delta (δ) sammenlignet med basisnivået. Normale verdier, dvs. negative verdier av det merkede atomet 13C hos uinfiserte pasienter varierer fra 0,15–0,46 %, og positive verdier ved infeksjon er 1,2–9,5 % med en ureahydrolysehastighet på mer enn 12–14 μg/min.

Enkelt sagt: påvisning av 13C-merket karbondioksid i utåndet luft indikerer at urea har blitt hydrolysert av ureaseenzymet H. pylori, noe som faktisk bekrefter dets tilstedeværelse i magen.

H. pylori pustetest

13C-UBT-testen eller 13C urea-pustetesten for Helicobacter pylori er en av de viktigste ikke-invasive metodene for å oppdage denne infeksjonen: med 100 % sensitivitet og 98 % spesifisitet er risikoen for falskt positive og falskt negative resultater sammenlignet med histologi og blodantistofftesting 2,3 % lavere.

Analysen er basert på hydrolyse av oralt administrert flytende urea merket med et karbonatom (stabil ikke-radioaktiv isotop) 13C (50–75 mg 13C-urea fortynnet i 100 ml væske) med H. pylori urease.

Urea merket med en isotopindikator gjennomgår hydrolyse i magen med frigjøring av ammoniakk og karbondioksid som inneholder merkede atomer, som diffunderer inn i blodet og skilles ut fra lungene under pusting. Det merkede karbondioksidet registreres av en analytisk enhet - et massespektrometer, hvis drift er basert på ikke-dispersiv isotopselektiv spektroskopi, eller en infrarød spektroskopisk analysator.

Hurtig ureasetest

Rapid Urease Test (RUT) utføres under endoskopisk undersøkelse av magesekken og tolvfingertarmen – ved bruk av moderne endofibroskoper – og samtidig innsamling av biopsiprøver. Biomaterialet skal tas fra den antrale delen av magesekken. Derfor er fibrogastroduodenoskopi eller FGDS med ureasetest en invasiv diagnostisk metode.

Den oppnådde biopsien nedsenkes fullstendig i et forberedt standardisert medium som inneholder agargel, urea, syre-base-indikator fenolsulfoftalein og et bakteriostatisk middel (tilsatt for å forhindre vekst av forurensende mikroorganismer og falskt positive resultater).

Hvis det finnes H. pylori-bakterier i magevevsprøven, vil ureasen de produserer hydrolysere urea og øke pH-verdien, noe som er tydelig synlig når indikatoren endrer farge fra gul til oransje (ved pH 6,8) og lilla (ved pH > 8). 75 % av positive tester endrer farge innen 120–180 minutter, og jo raskere indikatoren endrer farge, desto større er antallet bakterier. Men tester som ser negative ut, oppbevares i 24 timer.

Positiv hurtig ureasetest, hva betyr det? En positiv RUT-test – indikatoren blir rød – betyr at biopsiprøven som plasseres i agarmediet inneholder minst 105 H. pylori-bakterier, selv om konsentrasjonen vanligvis er høyere.

Sensitiviteten til ulike testmodifikasjoner varierer i området 90–98 %, og spesifisiteten – 97–99 %.

Som bemerket av gastroenterologer, hvis pasientens konklusjon indikerer en skarpt positiv ureasetest (tre kryss), betyr dette: pH > 8, og indikatoren endret farge på mindre enn 60 minutter fra biopsien ble nedsenket, noe som indikerer et stort antall H.pylori og et høyt nivå av ureaseekspresjon. Det omtrentlige antallet bakterier kan telles under histologisk undersøkelse av biopsien under et mikroskop, og hvis det overstiger 40-50 i det visualiserte området, anses infeksjonsnivået som høyt.

13C-urea-pustetesten gir sjelden falskt positive resultater, og hos pasienter med mistanke om magesår eller tolvfingertarmsår anses én positiv test å bekrefte diagnosen, mens et negativt resultat bør bekreftes ved EGD med ureatest.