Karyotypering

For studier av kromosomer benyttes ofte kortsiktige blodkulturer, samt benmargceller og fibroblastkulturer. Blodet levert til laboratoriet med antikoagulant underkastes sentrifugering for utfelling av røde blodceller, og leukocytter inkuberes i dyrkingsmediet i 2-3 dager. Fytohemagglutinin legges til blodprøven, da den akselererer agglutinering av erytrocytter og stimulerer delingen av lymfocytter. Den mest hensiktsmessige fasen for studiet av kromosomer er metafasen av mitose, slik at colchicin brukes til å stoppe delingen av lymfocytter på dette stadiet. Legge til dette stoffet i kulturen fører til en økning i andelen celler som er i metafase, det vil si på scenen av cellesyklusen, når kromosomene ses best. Hver kromosomreplikat (produserer sin egen kopi) og etter passende farger er synlig i form av to kromatider festet til sentromerer eller sentral sammenbrudd. Cellene behandles deretter med en hypotonisk natriumkloridløsning, fast og farget.

For farging av kromosomer brukes Romanovsky-Giemsa-fargestoffet, 2% acetaminomin eller 2% acetazarin oftere. De fargelegger kromosomer helt, jevnt (rutinemetoden) og kan brukes til å identifisere numeriske anomalier av menneskelige kromosomer.

For å få et detaljert bilde av strukturen av kromosomer, identifikasjon (identifikasjon) av individuelle kromosomer eller deres segmenter, anvendes forskjellige metoder for differensiell farging. De mest brukte metodene er Giemsa, samt G- og Q-bøyning. En mikroskopisk undersøkelse av stoffet langs lengden av kromosomet avslører en serie farget (heterochromatin) og umalet (eukromatin) bånd. Karakteren av den tverrgående strikking som er oppnådd i dette tilfellet tillater å identifisere hvert kromosom i settet, siden stripesendringen og deres størrelser er strengt individuelle og konstante for hvert par.

Metafaseplater av individuelle celler fotograferes. Individuelle kromosomer kuttes fra fotografiene og limes på arket i rekkefølge; Et slikt bilde av kromosomer kalles en karyotype.

Bruken av ytterligere farging, samt nye metoder for å oppnå kromosompreparater, som tillater strekking av kromosomene i lengde, øker nøyaktig nøyaktigheten av cytogenetisk diagnostikk.

En spesiell nomenklatur er utviklet for å beskrive den menneskelige karyotypen. Den normale karyotypen til en mann og en kvinne er betegnet henholdsvis 46, XY og 46, XX. I Downs syndrom, karakterisert ved tilstedeværelsen av et ekstra kromosom 21 (trisomi 21), er kvinners karyotype beskrevet som 47, XX 21+ og menn - 47, XY, 21+. I tilfelle av en strukturell anomali av kromosomet, er det nødvendig å indikere en endret lang eller kort arm: bokstaven p angir en kort arm, q en lang arm, og en translokasjon. Når den korte arm av kromosom 5 ("katt-skrik" syndromet) blir slettet, blir kvinnekaryotypen beskrevet som 46, XX, 5p-. Moderen til et barn med translokasjon Downs syndrom - en bærer med en balansert translokasjon på 14/21 har en karyotype på 45, XX, t (14q, 21q). Det translokasjonskromosomet dannes når de lange armer av kromosom 14 og 21 fusjonerer, korte skuldre går tapt.

Hver skulder er delt inn i distrikter, og i sin tur - i segmenter, og de og andre er utpekt av arabiske tall. Kromosomens sentromere er utgangspunktet for telling av regioner og segmenter.

Dermed benyttes fire markører for kromosomens topografi: kromosomnummer, skuldersymbol, distriktsnummer og segmentnummer i den angitte regionen. For eksempel betyr 6p21.3 posten som vi snakker om den sjette kromosompar, dets korte arm, område 21, segment 3. Det er flere valgtegn, spesielt Pter - enden av den korte arm, qter - enden av den lange arm.

Den cytogenetiske forskningsmetoden gjør det mulig å oppdage deletjoner og andre endringer i kromosomer bare i størrelsen på ca. 1 million baser (nukleotider).

[1], [2], [3], [4]