Immunofenotyping av hemoblastoser

Betydelig fremgang i hematologiske studier forbundet i de senere år med bruk av moderne immunologiske metoder og verktøy for automatisert analyse og sortering celler i perifert blod og benmarg - væskestrømsfotometere. Tradisjonelle morfologiske og cytokjemisk studium av substratet cellesykdom (blod, rød benmarg, lymfeknuter, milt, etc.), i mange tilfeller, særlig i lymfoproliferative sykdommer, avslører ikke hele utvalg av muligheter blant morfologisk like former og identifisere opprinnelsen til patologiske klon . Disse problemene kan kun løses ved å studere de immunologiske egenskapene til cellene. Hvert trinn av differensiering av hematopoetiske celler har sitt eget sett av antigener som er på den internasjonale klassifikasjon kjent som differensiering og differensiering er delt inn i klynger, betegnet CD.

Ved blokk differensiering av neoplastiske forandringer kan forekomme på hvilket som helst stadium av normal celleutvikling, noe som resulterer i en patologisk celleklone som danner underlaget sykdom, og som har den samme immunologiske (eller fenotypisk) karakteristikk. Etter en undersøkelse av disse markørene i celler kan bestemmes ved en hvilken som helst form eller utførelse av sykdommen er konsistente, dvs. På basis av immunologisk cellefenotype differensialdiagnose, som er den vanskeligste i lymfoproliferative sykdommer, fordi de viktigste cellesubstrat patologiske sykdommer som er nesten den samme type celler morfologisk.

Fenotyping tillater anvendelse av monoklonale antistoffer eksemplifisert blastiske celler og modne blod myeloid, mono-, lymfatisk serie, i nærvær av differensieringsantigener (reseptorer) i celleveggen. I avsnittet "Evaluering av organismens immunstatus", er karakteristika og diagnostisk betydning av cellemarkører delvis beskrevet; Nedenfor er en kort beskrivelse av antigencelle markører anvendt på diagnosen hemoblastose. På membranene av blodceller og rødt benmarg kan følgende antigener (markører) identifiseres.

• CD2 er et monomert transmembran glykoprotein. Det er tilstede på overflaten av alle sirkulerende T-lymfocytter og noen NK-lymfocytter. CD2 deltar i prosessen med alternativ aktivering av T-lymfocytter. Deteksjon av CD2 ved bruk av monoklonale antistoffer i klinisk praksis brukes til fenotyping av akutte T-celle leukemier, lymfomer, kroniske inflammatoriske og immunodefekterende tilstander.
• CD3 - et proteinkompleks assosiert med en antigen-spesifikk T-cellereceptor, er den viktigste funksjonelle markøren for T-lymfocytter. Det letter overføringen av aktiveringssignalet fra membranen til cytoplasma av cellen. CD3-deteksjon er indikert for diagnostisering av akutt T-celle leukemi, lymfom (CD3 er ikke uttrykt i ikke-T-celle lymfoide svulster) og immunbristssykdommer.
• CD4 - transmembrane glykoproteinet uttrykt av en undergruppe av T-hjelper (induktorer) utgjør 45% av de perifere blod lymfocytter. CD4-antigenene, så vel som av CD8, uttrykte alle de kortikale lymfocytter i de tidlige stadier av lymfocytt utvikling i thymus. Marg thymocytter, noe som er lik den fenotypen av modent CD4 + perifert blod T-celler (hjelpe-T-celler), enten allerede uttrykker CD4 eller CD8-reseptorer. I perifert blod merkes opptil 5% av cellene samtidig CD4 og CD8. Svakt uttrykk for CD4 er mulig på enkelte monocytceller. CD4 er uttrykt i de fleste tilfeller, T-celle lymfom, inkludert mycosis fungoides, og i HTLV-assosierte T-celle leukemi (HTLV - human T-lymfotropisk virus - human T-lymphotropic virus).
• CD5 - et enkeltkjede glykoprotein, som er tilstede på alle modne T-lymfocytter og de fleste tymocytter, blir svakt uttrykt av B-lymfocytter. CD5 detekteres på neoplastiske celler av B-celle kronisk lymfocytisk leukemi og sentro-cytisk lymfom. I andre typer ondartede lymfoide sykdommer - follikulært lymfom, hårete celle leukemi, stort celle lymfom - CD5 er ikke uttrykt.
• CD7 er et enkeltstrenget protein, den tidligste markøren for T-celledifferensiering. Det uttrykkes av pro-T-lymfocytter selv før de migrerer til tymus. CD7 detekteres på de fleste NK-celler, svakt uttrykk er notert på monocytter. B-lymfocytter og granulocytter inneholder ikke dette antigenet. Definisjonen av CD7 brukes til diagnose av lymfomer, barns T-celle lymfoblastisk leukemi.
• CD8 er et protein som består av to polypeptidkjeder koblet med disulfidbroer. Det uttrykkes av en subpopulasjon av cytotoksiske og suppressor-T-lymfocytter, som omfatter 20-35% av perifere blodlymfocytter. Dette antigenet har også NK lymfocytter, kortikale tymocytter, 30% medulære thymocytter og en subpopulasjon av røde benmargceller. CD8 undersøkes for kvantitativ evaluering av T-suppressorinnhold (se avsnitt "T-lymfocytter-suppressorer i blodet" ovenfor).

• CD10 er endopeptidasen assosiert med cellemembranen. CD10 uttrykker unge former for B-lymfocytter og en subpopulasjon av kortikale lymfocytter. CD10 uttrykker alle celler av ALL.
• CD11c uttrykker makrofager, monocytter, granulocytter, NK-celler og hårete celle leukemiceller på cellemembranen.
• CD13 - glykoproteinet uttrykt av celler av myelomonocytiske serie (progenitor-celler, neutrofiler, basofiler, eosinofiler, monocytter og celler av myeloid leukemi). Det er fraværende i T- og B-lymfocytter, erytrocytter og blodplater.
• CD14 er et overflate membran glykoprotein. Det uttrykkes hovedsakelig av monocytter og makrofager. CD14 detekteres i mer enn 95% monocytter av perifert blod og benmarg. Sterk ekspresjon av CD14 er observert i akutt myeloblastisk leukemi. Ved akutt og kronisk lymfoblastisk leukemi blir dette antigenet ikke uttrykt.
• CD15 er et oligosakkarid. Han deltar i prosesser av fagocytose og kjemotaksier. Dette antigenet er tilstede på overflaten av modne granulocytter og Berezovsky-Sternberg-celler. CD15-antigenuttrykk er påvist i Hodgkins sykdom. I ikke-Hodgkins lymfomer blir CD15 ikke oppdaget i de fleste tilfeller.
• CD16 uttrykkes på overflaten av granulocytter, monocytter, makrofager og NK-celler. Alle lymfocytter som uttrykker dette antigenet har evnen til antistoff-avhengig cellulær cytotoksisitet. CD16 bestemmes når man skriver kronisk myelocytisk leukemi, for å karakterisere NK-celler.
• CD19 er et glykoprotein til stede på alle perifere B-lymfocytter, så vel som på alle B-celleforløpere. Det er fraværende på plasmaceller. Dette er den tidligste markøren for B-celler, spiller en viktig rolle i regulering av aktivering og spredning av B-lymfocytter. CD19 uttrykkes på alle neoplastiske celler av akutt leukemi av B-celle opprinnelse, og er også tilstede i noen former for akutt monoblast leukemi.
• CD20 er et ikke-glykosylert protein. I ontogenesen av B-lymfocytter vises CD20 antigenet etter CD19 i scenen av pre-B-celledifferensiering av lymfocytter. Det er fraværende på plasmamembranen til plasmaceller. Det uttrykkes i ALLE, B-celle kronisk lymfocytisk leukemi, hårete celle leukemi, Burkitt lymfom og svært sjelden i akutt monoblast leukemi.
• CD21 er et glykoprotein, i en betydelig mengde er tilstede på B-lymfocytter i lymfoide organer og i en liten mengde på B-celler av perifert blod. CD21 er en reseptor for Epstein-Barr-viruset.
• CD22 er et protein som består av to polypeptidkjeder. Det uttrykkes på membranen til de fleste B-lymfocytter, inkludert progenitorceller (prolymphocytter). Antigenet uttrykkes ikke på B-lymfocytter (plasmaceller) etter deres aktivering. Det mest uttalt uttrykk for CD22 detekteres på celler med hårete celle leukemi, svak - i myeloid leukemi og ikke-T-celle ALL.
• CD23 er et glykoprotein uttrykt av aktiverte B-lymfocytter av perifert blod i mye større grad. CD23 medierer IgE-avhengig cytotoksisitet og fagocytose av makrofager og eosinofiler.
• CD25 er et enkeltkjede glykoprotein identifisert som en lavaffinitetsreseptor for IL-2. Denne reseptoren uttrykkes på aktiverte T-lymfocytter og, med lavere tetthet, på aktiverte B-celler. I det perifere blodet av friske mennesker er antigenet tilstede i mer enn 5% av lymfoide celler.
• CD29 er en fibronektinreseptor. Det er utbredt i vev, det uttrykkes av leukocytter. CD29-deteksjon på perifere blodceller brukes til å typifisere en subpopulasjon av T-celler som har CD4 + CD29 + fenotypen, som kalles Type 2-hjelperen (Th2). Disse cellene, gjennom produksjon av lymfokiner, deltar i realiseringen av den humoral immunresponsen.
• CD33 er et transmembran glykoprotein. Det er tilstede på overflaten av celler av myeloid og monocytisk serien. Det er funnet på overflaten av monocytter og, i mindre grad, granulocytter av perifert blod. Omtrent 30% av røde benmargceller uttrykker CD33, inkludert myeloblaster, promyelocytter og myelocytter. Antigen er fraværende på membraner av pluripotente stamceller. CD33 brukes til å karakterisere celler i myeloid leukemier. Leukemi celler av lymfoid og erythroid opprinnelse uttrykker ikke CD33.
• CD34 er et fosfoglykoprotein, uttrykt av hematopoietiske stamceller, inkludert monopotente stamceller. Det mest uttalte uttrykket for Ar er observert i tidlige progenitorer; Når cellene er modne, faller markørets uttrykk. CD34 finnes også på endotelceller. CD34 brukes til å karakterisere celler i akutt myelogen og lymfoblastisk leukemi. Med kronisk lymfocytisk leukemi og lymfomer blir CD34-antigenuttrykk ikke detektert.

• CD41a uttrykkes av blodplater og megakaryocytter. Monoklonale antistoffer for CD41a-deteksjon brukes til å diagnostisere megakaryoblastisk leukemi. Med Glązmann-trombastheni er uttrykket av dette antigen fraværende eller signifikant undertrykt.
• CD42b er et membran glykoprotein bestående av to polypeptidkjeder. Markøren er funnet på overflaten av blodplater og megakaryocytter. I klinisk praksis brukes deteksjon av CD42b til å diagnostisere trombocytopati - Bernard-Soulier syndrom.
• CD45RA tilhører klassen av transmembran glykoproteiner. Dette er et vanlig leukocyttantigen. Det uttrykkes på cellemembranen til B-lymfocytter, i mindre grad T-lymfocytter og på modne medullære tymocytter. Markøren er ikke uttrykt av granulocytter.
• CD45RO er en isoform med lav molekylvekt av CD45RA - en vanlig leukocytt Ag. De finnes på T-celler (minne T-lymfocytter), subpopulasjoner av B-lymfocytter, monocytter og makrofager. Monoklonale antistoffer mot CD45RO virker sammen med de fleste tymocytter, en subpopulasjon av hvile CD4 + og CD8 + T-lymfocytter og modne aktiverte T-celler. Celler av myelomonocytisk opprinnelse, granulocytter og monocytter bærer også dette antigenet. Det oppdages i sentroblastiske og immunoblastiske lymfomer.
• CD46-O-glykosylert dimer. Det er vidt fordelt i vev og uttrykkes T- og B-lymfocytter, monocytter, granulocytter, NK-celler, blodplater, endotelceller, fibroblaster, men er fraværende på overflaten av erytrocytter. CD46 gir vevbeskyttelse mot komplementhandling.
• CD61 er et blodplateantigen. Det uttrykkes på blodplater av perifert blod og rødt benmarg, samt på megakaryocytter og megakaryoblaster. Definisjonen er brukt som markør for akutt megakaryoblastisk leukemi. Ekspresjon av antigen er fraværende eller undertrykt hos pasienter med Glanzmann trombasteni.
• CD95, også kalt Fas eller APO-1, er et transmembran glykoprotein, et medlem av familien av reseptorer av tumor nekrosefaktor. Det uttrykkes i signifikante mengder på T-lymfocytter i perifert blod (CD4 + og CD8 +) og, i mindre grad, på B-lymfocytter og NK-celler. Dette antigenet uttrykkes også på granulocytter, monocytter, vevceller og neoplastiske celler. Binding av CD95 til Fas-liganden (CD95L) inducerer apoptose i cellene.
• CD95L eller Fas-ligand, et membranprotein som tilhører familien av reseptorer av tumornekrosefaktor. Dette antigenet uttrykkes av cytotoksiske T-lymfocytter, NK-celler og svært ofte av tumorceller; den viktigste indusatoren for apoptose i celler.
• HLA-DR er en monomorf determinant av klasse II-molekyler av det viktigste humane histokompatibilitetskomplekset (HLA). Markøren er uttrykt på Langerhans-celler, dendrittiske celler av lymfoide organer, og visse typer av makrofager, B lymfocytter, aktiverte T-celler og thymus epitelceller. Testen for denne markøren brukes til å kvantifisere aktiverte T-lymfocytter med fenotypen CD3 + HLA-DR +.

Ved å bruke et annet utvalg av monoklonale antistoffer til markører, er det mulig å lage et fenotypisk portrett av celler som er karakteristiske for en gitt form for leukemi.

Dessuten bruker immunfenotyping teknikker for diagnose og differensialdiagnose av hematologiske kreftformer, spesielt viktig slått deres anvendelse i behandlingen for å vurdere tilstanden til remisjon og gjenværende populasjon av leukemiceller. Å vite den fenotypiske "portrett" av blastceller i perioden diagnose, disse markørene den finner celle leukemi klone i remisjon, og fra økning i antall - å forutsi utviklingen av tilbakefall lang (for 1-4 måneder) før dens kliniske og morfologiske trekk.

[1], [2], [3], [4],