Hepatitt A -virus

Viral hepatitt A er en menneskelig smittsom sykdom som er preget av en overveiende leverskade og manifestert klinisk rus og gulsott. Hepatitt A-virus ble oppdaget i 1973 av S. Feynstonom Ved hjelp av fremgangsmåten i immunelektronmikroskopi og ved å infisere aper (et al.) - sjimpanser og silkeaper. Fremgangsmåten immunelektronmikroskopi er at avføringen til filtratet ble det tilsatt hepatitt A pasient spesifikt antistoff (konvalesent serum), og bunnfallet ble utsatt for elektronmikroskopi. På grunn av vekselvirkning av virus med spesifikke antistoffer, gjennomgår de spesifikk aggregering. I dette tilfellet er de lettere å oppdage, og aggregering under påvirkning av antistoffer bekrefter patogenens spesifisitet. Oppdagelsen av S. Feinstone ble bekreftet i forsøk på frivillige.

Hepatitt A-viruset har en sfærisk form, diameteren til virionen er 27 nm. Genomet er representert ved et enkeltstrenget positivt RNA med en masse på 2,6 MD. Supercapsid er fraværende. Symmetri typen er kubisk - icosahedron. Kapsidet har 32 capsomer, det dannes av fire polypeptider (VP1-VP4). Ved egenskapene tilhører hepatitt A-virus slekten Heparnovirus, familien Picornaviridae. Antigenisk er hepatitt A-virus (HAV - hepatitt A-virus) homogent. HAV multipliserer godt i kroppen av sjimpanser, baboons, hamadryls og gambling aper (marmosets). I lang tid kunne viruset ikke dyrke. Bare på 1980-tallet. Det var mulig å oppnå cellekulturer der HAV propagerer. Til å begynne med anvendt for disse formål, udødelig embryonale nyrecellelinje rhesus ape (dyrknings FRhK-4), og nå - transplantert nyrecellelinje fra grønn ape (Culture 4647).

I henhold til anbefalingene fra WHO eksperter, anvendt følgende nomenklatur av hepatitt A-virus markører: hepatitt A-virus - NAU antistoffer mot hepatitt A-virus: anti-HAV-IgM og anti-HAV IgG.

HAV er små partikler med en diameter på 27-30 nm, som har icosahedral symmetri og har homogenitet. På elektrondiffraksjonsmønsteret oppnådd ved metoden for immunaggregering, detekteres elektron-tette partikler med overfladisk plassert symmetrisk anordnede kapsomer. Med negativ kontrastering, oppdages både komplette og tomme partikler i preparatene. Nukleokapsid NAV, i motsetning til influensa, har ikke overflateutspring og membraner. Det er også viktig at virion HAV ikke har en hjerteformet struktur.

Ifølge sine fysikalsk-kjemiske egenskaper av hepatitt A virus er relatert til familien av Picornaviridae, slekten Enterovirus med atomnummer 72. Men dette taksonomi var også uvanlig, og som fant det mulig å la terminologien "hepatitt A-virus".

Som alle virus av familien Picornaviridae inneholder hepatitt A-viruset ribonukleinsyre. Noen laboratorier har vist muligheten for kloning av genomet av hepatitt A-viruset, noe som åpner utsiktene for å skaffe vaksinepreparater.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

Resistens av hepatitt A-viruset

Viruset er relativt motstandsdyktig mot høy temperatur, syrer, fettløsningsmidler (det finnes ingen lipider), desinfeksjonsmidler, det tåler en lav temperaturbrønn. Alt dette bidrar til langsiktig bevaring i det ytre miljø. Ved romtemperatur overlever det i flere uker, ved 60 ° C, mister man delvis infeksjonsevne etter 4-12 timer, helt etter noen minutter ved 85 ° C. Helt motstandsdyktig mot klor, som det kan trenge inn i kranvannet gjennom barrierer av vannbehandlingsanlegg.

Oppsummering av alle dataene, vi kan karakterisere hepatitt A-viruset som følger:

• Den naturlige mesteren er mann;
• eksperimentelle dyr - marmozet, sjimpanse;
• kilde til infeksjon - avføring
• sykdom - epidemi og endemisk;
• overføringsruten er fekal-muntlig;
• inkubasjonsperiode - 14-40 dager;
• overgang til kronisk hepatitt - ikke nevnt.

Immunologiske egenskaper til NAV er som følger:

• Prototypestammer - Ms-1, CR-326, GVG. Alle er immunologisk like eller identiske;
• Antistoffer - IgM og IgG, produseres som respons på innføring av virusproteiner og er beskyttende;
• Jeg Den trofiske virkningen av humant serum y-globulin - beskytter eller demper sykdommen under administrasjonsbetingelsen før infeksjon eller i inkubasjonsperioden.

Fysisk-kjemiske egenskaper av NAU er som følger:

• Morfologi er en ikke-skallet sfærisk partikkel med kubisk symmetri, kapsiden består av 32 capsomere;
• Diameteren er 27-30 nm;
• SsS1 Tetthet (g / cm3) - 1,38-1,46 (åpne partikler), 1,33-1,34 (modne virion), 1.29-1.31 (umodne virioner, tomme partikler);
• Sedimentasjonskoeffisienten er 156-160 modne virioner;
• Nukleinsyre - enkeltstrenget, lineært RNA;
• Relativ molekylvekt - 2,25 106-2,8 106KD;
• Antall nukleotider er 6.500-8.100.

NAV-stabiliteten i fysisk-kjemiske effekter er som følger:

• Kloroform, eter - er stabil;
• Klor, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - delvis inaktivering;
• Kloramin, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - fullstendig inaktivering;
• Formalin, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 timer - fullstendig inaktivering, 1: 350, 20 ° С, 60 min - delvis inaktivering.

Temperatur~~POS=HEADCOMP:

• 20-70 ° C - stabil;
• 56 ° С, 30 minutter - det er stabilt;
• 60 ° С, 12 timer - delvis inaktivering;
• 85 ° С, 1 min - full inaktivering;
• Autoklavering, 120 ° C. 20 minutter - fullstendig inaktivering;
• Tørrvarme, 180 ° C, 1 time - fullstendig inaktivering;
• UV, 1,1 W, 1 min - fullstendig inaktivering.

De presenterte dataene viser at de fysisk-kjemiske egenskapene til hepatitt A-viruset er nærmest enterovirus. Som andre enteroviruser er HAV resistent overfor mange desinfeksjonsløsninger, helt inaktivert i flere minutter ved 85 ° C og autoklaveres.

Det er bevist at hepatitt A-viruset kan reproduseres i primære og transplanterte monolagskulturlinjer av humane og ape-celler. Spesielt aktiv reproduksjon av hepatitt A-virus i kulturer in vitro observeres ved bruk av leverekstrakter av ape-pasienter som utgangsmateriale. Imidlertid bør det bemerkes at ved alle forsøk i henhold til en reproduksjon av hepatitt A-virus in in vitro-kulturen bemerkelsesverdig lang inkubasjonstid i primær passasjene (-10 til 4 uker), deretter akkumulering av virale genetiske materiale øker, men de absolutte verdier er meget ubetydelig, noe som gir mange forskere anledning til å snakke om ufullstendig replikasjon av hepatitt A-viruset i vevskulturer.

Oppsummering av litteraturdata om reproduksjon av hepatitt A-virus fra ikke-rotkulturer, det kan sies at faktumet med en langvarig erfaring med HAV in vitro er utvilsomt. Optimale forhold for stabilt høyt nivå av viral replikasjon er ikke endelig identifisert, og dette begrenser studiet av dets biologiske egenskaper, produksjon av en kilde til reagenser for produksjon av diagnostikk og utforming av vaksiner.

Samtidig kan mer optimistiske vurderinger om dette problemet finnes i litteraturen. Løsningen av alle problemer knyttet til dyrking av hepatitt A-viruset er et spørsmål for den nærmeste fremtid. Ved å studere de optimale betingelser HAV forplantning i cellekultur embryonale nyre rhesus-aper viste to faser: en fase av infeksiøs virusproduksjon (opp til 6-8 dager på den femte passasje) og fasen av intensiv akkumulering av virusantigen. Det er også vist at den viktigste opphopningen av virusantigenet skjer under betingelsene for såkalt rullekultivering (roterende flasker). På denne måten åpnes store muligheter for å skaffe et kulturelt antigen i store mengder, og følgelig vil et utgangsmateriale for fremstilling av diagnostiske systemer og fremstilling av vaksinepreparater oppstå.

Epidemiologi av hepatitt A

Hepatitt A-virus har høy patogenitet for mennesker. Ifølge WHOs konklusjon (1987), for sykdomsutbrudd, er det nok å infisere bare en virion. Imidlertid er den praktiske smittsomme dosen sannsynligvis mye høyere. Kilden til infeksjon er bare en infisert person. Viruset frigjøres i store mengder med avføring 12-14 dager før utseendet på gulsot og innen 3 uker. Icteric periode. Signifikante forskjeller i isoleringen av patogenet hos pasienter med icteric, gulsott og asymptomatiske former for hepatitt A har ikke blitt avslørt. Metoden for infeksjon er fecal-oral, hovedsakelig vandig, og også ved husholdnings- og matruter. Metoden for infeksjon er fecal-oral, hovedsakelig vandig, og også ved husholdnings- og matruter. Hovedveien for overføring av viruset er vann. Det er også mulig å luftbårne infeksjoner. Følsomheten til befolkningen er universell. For det meste er barn under 14 år syk. Sykdommen har en markert høst-vinter sesongmessighet.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

Symptomer på hepatitt A

Inkubasjonstiden varierer fra 15 til 50 dager, som avhenger av mengden av infeksjonsdosen av viruset, men i gjennomsnitt er det 28-30 dager. En gang i kroppen, hepatitt A-virus replikerer i de regionale lymfeknuter, i blodet, og deretter til leverceller og forårsaker diffuse akutt hepatitt som er ledsaget av lesjoner i lever og hepatocytter retikuloendoteliale celler og en nedgang i dens avgiftnings og barrierefunksjoner. Skader på hepatocytter forekommer ikke på grunn av virusets direkte virkning, men som følge av immunopatologiske mekanismer. Den mest typiske bilde av hepatitt A er akutt ikteriske syklisk form: inkubasjonsperioden den prodromale (preicteric), gulsott og rekonvalesens periode. Imidlertid, i den foci av infeksjon avdekker et stort antall pasienter med asymptomatisk og anicteric former av infeksjon, hvor mange som dominerer over ikteriske ( "isfjell fenomen").

Post-infeksjonell immunitet er sterk og langvarig, forårsaket av virale nøytraliserende antistoffer og immune minnesceller.

Mikrobiologisk diagnose av hepatitt A

Diagnostisering av hepatitt A (bortsett fra infeksjon dyr - sjimpanser marmozet, bavianer, som vi har) basert på forskjellige immunologiske metoder: DGC immunfluorescens metode, hemagglutinasjon immun adhesjon (kompleks av viralt antigen + antistoff i nærvær av komplement adsorbert på erytrocytter, og forårsaker deres adhesjon) . Imidlertid er anvendeligheten av disse fremgangsmåter begrenset på grunn av mangel av spesifikke virale antigener og immunfluorescens Reaksjonen krever leverbiopsier, noe som er uønsket. Pålitelig og spesifikk metode er immunelektronmikroskopi, men det er meget tidkrevende. Derfor, inntil den eneste akseptabel metode for den immunologiske reaksjon er immunosorbentanalyse fast fase i form av IPM, eller RIM, spesielt i modifiseringen av "capture" av immunoglobulin M. I vårt land for dette formål foreslåtte testsystem - "DIAG-A-GEO". Arbeidsprinsippet for dette testsystemet er som følger. På veggene av polystyren lunochek sorbert første antistoffer til immunoglobuliner av klasse M (antiimmunoglobuliny M) ble deretter tilsatt til den undersøkte pasientserum. Hvis det er antistoff-klasse IgM, vil de bindes til et antistoff-Ti-M, deretter tilsatt til en spesiell viral antigen (hepatitt A virus), som oppnås ved å dyrke i cellekultur. Systemet renses, og til dette tilsettes antivirale antistoffer merket med pepperrot peroksydase. Hvis det har vært samspillet mellom alle fire komponenter i systemet, er det en fire-lag "sandwich":

• antiimmunoglobuliner M,
• immunglobuliner M (mot hepatitt A-virus - i pasientens test-serum)
• viralt antigen,
• antivirale antistoffer merket med et enzym.

For å oppdage dette komplekset, legges et substrat for enzymet til lunetter. Under påvirkning av enzymet blir det ødelagt, og et farget produkt dannes. Fargens intensitet kan måles kvantitativt med et spektrofotometer eller fotokorimeter.

Fordelen med metoden for "fangst" av IgM er at antistoffer av denne klassen av immunoglobuliner opptrer ved primær immunrespons og indikerer et aktivt stadium av infeksjon, de forsvinner etter den overførte sykdommen. Antivirale antistoffer som tilhører IgG-klassen, derimot, vedvarer lenge etter sykdommen, og sikrer den oppnådde immunitet. For påvisning av hepatitt A-virus foreslås en DNA-probemetode: en komplementær vRNA-probe brukes som en probe.

Behandling av hepatitt A

På grunn av det faktum at interferonproduksjonen forstyrres i viral hepatitt, er behandlingen av hepatitt A basert på bruk av interferon og inducer av sin endogene syntese amixin.

Spesifikk forebygging av hepatitt A

Tidligere mye brukt seroprevention hepatitt A ved anvendelse av gammaglobulin ble ikke berettiget, imidlertid ble det lagt vekt på holde immunisering, utføres vaksinering mot hepatitt A. Til dette formål utvikles ulike varianter av vaksiner og brukes allerede. I Russland ble det oppnådd en effektiv vaksine mot hepatitt A i 1995, og nå har den blitt vellykket anvendt.