Antibiotikaresistenstesting: forberedelse, dechiffrering, hvor mye som gjøres

I dag blir testing av antibiotikafølsomhet stadig mer populært. Menneskelig mikroflora er ganske mangfoldig, representert av et stort antall mikroorganismer i ulike biotoper.

Legemiddelselskaper har utviklet et stort antall antibakterielle midler, antibiotika, som bidrar til å opprettholde et normalt forhold og antall mikrobielle populasjoner. Med starten på antibiotikaæraen har mange sykdommer som tidligere ble ansett som dødelige blitt kurert. Men mikroorganismer streber også etter å overleve, og tilpasser seg gradvis virkningen av antibakterielle legemidler. Over tid har mange av dem tilegnet seg resistens mot mange legemidler, festet den i genotypen og begynt å overføre den fra generasjon til generasjon. Dermed er nye mikroorganismer i utgangspunktet ufølsomme for visse legemidler, og bruken av dem kan være ineffektiv. Farmasøyter utvikler stadig flere nye produkter, legger til nye aktive komponenter i dem og endrer den grunnleggende formelen. Men gradvis utvikler det seg også resistens mot dem.

Årsaken til den økte resistensen i mikrofloraen mot mange legemidler, og til og med deres analoger, ligger ofte i feil og ukontrollert bruk av antibiotika. Leger foreskriver antibiotika og kombinasjoner av disse for ulike bakteriesykdommer. Samtidig er det ingen foreløpig vurdering av hvor effektive de vil være, og den optimale doseringen velges ikke, noe som er svært viktig både for behandling og for å forhindre mekanismer for utvikling av ytterligere resistens. Mange foreskriver feilaktig antibakteriell behandling selv for virussykdommer, noe som er ineffektivt, siden antibiotikumet ikke virker mot virus.

Terapi foreskrives ofte uten foreløpig sensitivitetstest, og valg av aktivt stoff og nødvendig dosering for hver spesifikke sykdom og biotop utføres ikke. Siden antibiotika foreskrives "blindt", er det ofte tilfeller der de ikke viser noen aktivitet mot mikroorganismene som forårsaket sykdommen, og hvis antall må reduseres. I stedet påvirker de andre representanter for mikrofloraen, noe som resulterer i dysbakteriose, som også er en ganske farlig patologi og kan føre til alvorlige konsekvenser. Spesielt farlige er tilfeller der et antibiotikum ødelegger den normale mikrofloraen, som er utformet for å beskytte kroppen og opprettholde dens normale funksjon. Det er også tilfeller der for mye eller for lite av legemidlet foreskrives.

Pasienter er også uansvarlige når det gjelder behandling. Ofte stoppes behandlingen etter at sykdomssymptomene har sluttet å plage. Samtidig foretrekker mange å ikke fullføre hele kuren. Dette er en av faktorene som bidrar til utvikling av resistens hos bakterier. Hele kuren er utformet for å drepe patogen mikroflora fullstendig. Hvis kuren ikke fullføres, blir den ikke fullstendig drept. De mikroorganismene som overlever gjennomgår mutasjoner, utvikler mekanismer som gir dem beskyttelse mot dette legemidlet og overfører det til neste generasjoner. Faren er at resistens utvikles ikke bare i forhold til dette spesifikke legemidlet, men også mot hele legemiddelgruppen.

Derfor er et av de mest effektive virkemidlene for rasjonell terapi og forebygging av resistens i dag den foreløpige bestemmelsen av følsomhet for det foreskrevne legemidlet og valget av optimal dosering.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ]

Indikasjoner for prosedyren Antibiotikasensitivitetstester

Normalt bør en slik analyse utføres i alle tilfeller der antibakteriell behandling er nødvendig. Basert på de grunnleggende lovene for antibiotikabehandling, kan ethvert antibiotikum kun foreskrives etter at en foreløpig vurdering av mikrofloraens følsomhet for dette stoffet er utført, og den optimale konsentrasjonen av virkestoffet er bestemt under laboratorieforhold. I praksis, på grunn av ulike årsaker og omstendigheter, utføres ikke en slik studie før behandlingsstart, og legen er tvunget til å velge et legemiddel "tilfeldig".

I dag utføres sensitivitetstesting kun i tilfeller der legen har alvorlig tvil om hvorvidt det foreskrevne legemidlet vil være effektivt, i tilfeller av langvarig mangel på effekt fra legemidlet, og også ved gjentatt bruk av det samme legemidlet i en begrenset periode. Sensitivitet bestemmes ofte i behandlingen av seksuelt overførbare sykdommer. Mange spesialister tyr til analyse ved bivirkninger, allergiske reaksjoner, og når det er nødvendig å erstatte ett legemiddel med et annet.

Analysen brukes også ofte til å velge legemidler for antibakteriell behandling i restitusjonsperioden etter operasjoner, laparoskopiske inngrep og organfjerning. Ved kirurgiske og purulent kirurgiske avdelinger er en slik studie rett og slett nødvendig, siden resistens utvikler seg ganske raskt her. I tillegg utvikler det seg superresistente "sykehuservervede". Mange private klinikker tar forskrivning av legemidler med fullt ansvar - først etter å ha kontrollert følsomheten. I mange tilfeller tillater ikke budsjettet til statlige institusjoner å gjennomføre slike studier for hver pasient som trenger antibakteriell behandling.

[ 9 ], [ 10 ], [ 11 ]

Forberedelse

Forberedelsen til studien krever ingen spesielle tiltak. Det er det samme som for alle tester. Noen dager før studien bør du avstå fra å drikke alkohol. Om morgenen, dagen du samler inn materialet, kan du i de fleste tilfeller ikke spise eller drikke. Men alt avhenger av typen analyse. Materialet for studien kan være forskjellig, avhengig av sykdommen.

Ved sykdommer i hals og luftveier tas det en hals- og neseprøve. Innen venerologi, gynekologi og urologi tas det kjønnsprøver og blodprøver for analyse. Ved nyresykdommer kreves det ofte urin. Ved mage-tarmsykdommer og noen infeksjonssykdommer undersøkes avføring og oppkast. Noen ganger kan morsmelk, neseutflod, øyesekresjon, spytt og sputum undersøkes. Ved alvorlige patologier og mistanke om en infeksjonsprosess undersøkes til og med cerebrospinalvæske. Spekteret er ganske bredt.

Egenskapene ved innsamling av materialet bestemmes av dets biologiske tilhørighet. Urin og avføring samles derfor opp om morgenen i en ren beholder eller i en spesiell beholder for biologisk materiale. Morsmelk samles opp før mating. Den midterste delen tas for undersøkelse. Utstryket samles opp med en spesiell vattpinne, som føres langs slimhinnene og deretter senkes ned i et reagensrør med et forberedt medium. Blod samles opp i et reagensrør, fra en finger eller vene. Ved innsamling av utstryk fra urinrøret eller skjeden anbefales det å avstå fra samleie i flere dager.

Når man samler inn biologisk materiale til forskning, er det først og fremst nødvendig å sikre riktig innsamling og sterilitet. Men i de fleste tilfeller er dette en bekymring for medisinsk personell, pasienten bør ikke bekymre seg for dette. Oftest vender gynekologer og urologer seg til slike studier, på andreplass - øre-nese-hals-leger i behandlingen av sykdommer i nesesvelget og svelget, øvre luftveier.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Teknikk Antibiotikasensitivitetstester

Det innsamlede biologiske materialet leveres til laboratoriet under sterile forhold, hvor videre forskning utføres. Først utføres den primære såingen på universelle næringsmedier. En del av materialet tas også for mikroskopisk undersøkelse. Et utstryk for mikroskopi utarbeides, en studie utføres, ved hjelp av hvilken det er mulig å bestemme et omtrentlig bilde, for å anta hvilke mikroorganismer som er tilstede i prøven. Dette gjør det mulig å velge de mest optimale miljøene for videre forskning og identifisering av mikroorganismer. Tegn som indikerer betennelse og en onkologisk prosess kan også sees ved mikroskopi.

I løpet av flere dager vokser kolonier av mikroorganismer i en petriskål. Deretter tas flere kolonier og overføres til selektive næringsmedier, som gjør det mulig å bestemme en omtrentlig gruppe av mikroorganismer. De inkuberes i flere dager i en termostat, og deretter begynner identifikasjonen (bestemmelse av typen mikroorganisme). Identifikasjonen utføres ved hjelp av spesielle biokjemiske og genetiske tester, identifikatorer. I tillegg kan immunologiske studier utføres.

Etter at hovedpatogenet er isolert, vurderes dets følsomhet for antibiotika. Det finnes flere metoder for dette. Den mest brukte metoden er seriefortynning, eller skivediffusjonsmetoden. Metodene er beskrevet i detalj i mikrobiologiske oppslagsverk, retningslinjer og laboratoriestandarder.

Kjernen i skivediffusjonsmetoden er at identifiserte mikroorganismer sås på et næringsmedium, og spesielle skiver dynket i antibiotika plasseres oppå. Såmaterialet inkuberes i en termostat i flere dager, deretter måles resultatene. Graden av bakteriell veksthemming av hvert antibiotikum vurderes. Hvis bakterien er følsom for antibiotikumet, dannes en "lysesone" rundt skiven, hvor bakteriene ikke formerer seg. Veksten deres er langsom eller helt fraværende. Diameteren på veksthemmingssonen brukes til å bestemme graden av mikroorganismers følsomhet for antibiotikumet og formulere ytterligere anbefalinger.

Seriell fortynningsmetoden er den mest nøyaktige. For dette sås mikroorganismer på flytende næringsmedier, et antibiotikum fortynnet i henhold til desimalfortynningssystemet tilsettes. Etter dette plasseres reagensrørene i en termostat for inkubasjon i flere dager. Følsomhet for antibiotika bestemmes av graden av bakterievekst i næringsbuljongen med tilsetning av antibiotika. Minimumskonsentrasjonen der mikroorganismer fortsatt vokser registreres. Dette er minimumsdosen av legemidlet (omregning fra mikrobiologiske enheter til det aktive stoffet er nødvendig).

Dette er standard mikrobiologiske metoder som danner grunnlaget for all forskning. De innebærer manuell utførelse av alle manipulasjoner. I dag er mange laboratorier utstyrt med spesialutstyr som utfører alle disse prosedyrene automatisk. En spesialist som arbeider med slikt utstyr trenger bare evnen til å jobbe med utstyret, overholdelse av sikkerhets- og sterilitetsregler.

Det er nødvendig å ta hensyn til at sensitivitetsindeksene i laboratorieforhold og i levende organismer varierer kraftig. Derfor foreskrives en person en høyere dose enn bestemt under studien. Dette skyldes at kroppen ikke har slike optimale forhold for vekst av bakterier. I laboratoriet skapes "ideelle forhold". En del av legemidlet kan nøytraliseres ved hjelp av spytt og magesaft. En del nøytraliseres i blodet av antistoffer og antitoksiner produsert av immunsystemet.

Urin antibiotikafølsomhetstest

Først samles biologisk materiale inn. For å gjøre dette må du samle den midtre delen av morgenurinen og levere den til laboratoriet. Det er viktig å opprettholde sterilitet og ikke ta antibiotika i flere dager før analysen, ellers kan du få et falskt negativt resultat. Etter dette utføres en standard såing, hvis essens er å isolere en renkultur av patogenet og velge et antibiotikum som vil ha en optimal bakteriedrepende effekt på det. Den nødvendige konsentrasjonen av antibiotikumet bestemmes.

Urinanalyse foreskrives oftest når det er mistanke om en smittsom og inflammatorisk prosess i kjønnsorganene, med immunsvikt og metabolske forstyrrelser. Normalt er urin en steril væske. Varigheten av en slik studie er 1-10 dager og bestemmes av mikroorganismens veksthastighet.

Kultur- og antibiotikafølsomhetstesting

Studien innebærer å isolere mikroorganismen som er patogenet i en renkultur. Noen ganger kan det være flere slike mikroorganismer (blandet infeksjon). Noen mikroorganismer er i stand til å danne biofilmer, som er en slags "mikrobielle samfunn". Overlevelsesraten for biofilmer er mye høyere enn for enkeltmikroorganismer eller sammenslutninger. I tillegg er ikke alle antibiotika i stand til å påvirke biofilmen og trenge inn i den.

For å bestemme patogenet, for å isolere det til renkultur, utføres såing. Under studien utføres flere såinger i forskjellige næringsmedier. Deretter isoleres en renkultur, dens biologiske tilhørighet bestemmes, og følsomhet for antibakterielle legemidler bestemmes. Den optimale konsentrasjonen velges.

Ethvert biologisk materiale kan brukes til studien, avhengig av sykdommen og lokaliseringen av den smittsomme prosessen. Varigheten bestemmes av vekstraten til mikroorganismer.

[ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]

Test av avføringsfølsomhet

Avføring undersøkes ved ulike mage- og tarmsykdommer, ved mistanke om infeksjonsprosess, bakteriell forgiftning, matforgiftning. Formålet med studien er å isolere patogenet og velge optimale antibakterielle legemidler for det, som vil ha høy aktivitet. Viktigheten av denne typen studie er at det er mulig å velge et legemiddel som kun vil påvirke patogenet og ikke vil påvirke representanter for den normale mikrofloraen.

Det første og svært viktige stadiet er å samle avføring. Den bør samles i en spesiell steril beholder om morgenen. Den bør oppbevares i ikke mer enn 1-2 timer. Kvinner med menstruasjon bør utsette analysen til slutten, da nøyaktigheten av resultatene vil endre seg. Materialet leveres til laboratoriet for testing. Analysen utføres ved hjelp av standard mikrobiologiske teknikker for såing og isolering av en renkultur. Et antibiogram utføres også. Basert på konklusjonen utvikles anbefalinger, og et videre studieskjema bestemmes.

[ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ]

Dysbakterioseanalyse med sensitivitet

Materialet for studien er avføring tatt umiddelbart etter avføring. Normal mikroflora i mage-tarmkanalen består av representanter for normalfloraen og flere representanter for patogen flora. Deres artssammensetning, mengde og forhold er strengt definert og holdes innenfor den tillatte normen. Hvis dette forholdet forstyrres, utvikler dysbakteriose seg. Det kan manifestere seg på forskjellige måter. Infeksjonssykdommer kan utvikle seg hvis mengden patogen mikroflora øker kraftig. Hvis mengden av en mikroorganisme synker kraftig, okkuperes det frie rommet av andre representanter som ikke er typiske for mage-tarmkanalen, eller patogene. Ofte okkuperes det frie rommet av en sopp, og da utvikles ulike soppinfeksjoner og candidiasis.

For å bestemme den kvantitative og kvalitative sammensetningen av tarmmikrofloraen utføres en avføringsanalyse for dysbakteriose. Konvensjonelt er alle representanter som lever i tarmen delt inn i tre grupper: patogene, opportunistiske og ikke-patogene. Følgelig består analysen av tre deler. Hver gruppe mikroorganismer har sine egne behov for en næringskilde, energi. Hver gruppe krever separate næringsmedier og selektive tilsetningsstoffer.

Først utføres mikroskopi og primærsåing. Deretter, etter såing, velges de største koloniene, som har lignende morfologiske trekk som representanter for hver gruppe. De overføres til selektive medier. Etter at mikroorganismene har vokst, identifiseres de og testes umiddelbart for følsomhet for antibiotika. Standard mikrobiologiske metoder brukes.

Studien av en gruppe patogene mikroorganismer, i tillegg til standardstudier, involverer bestemmelse av tyfus-, paratyfus- og dysenteribakterier. Det bestemmes også om en person er bærer av disse mikroorganismene. En omfattende studie for dysbakterier inkluderer også en studie av representanter for bifidobakterie- og laktobacillgruppen. Studien tar omtrent en uke og avhenger av vekstraten til mikroorganismene.

[ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ]

Testing av bakteriofagfølsomhet

Ved tarminfeksjon brukes ofte bakteriofager til behandling i stedet for antibiotika. Bakteriofager er bakterievirus som kun er mottakelige for dem. De finner en bakterie som de komplementerer, trenger inn i den og ødelegger gradvis bakteriecellen. Som et resultat stopper den infeksjonelle prosessen. Men ikke alle bakterier er følsomme for bakteriofager. For å sjekke om en gitt bakteriofag vil vise aktivitet mot representanter for mikrofloraen, må en analyse utføres.

Materialet for studien er avføring. Analysen må leveres til laboratoriet innen en time, ellers vil den være umulig å gjennomføre. Det er nødvendig å utføre analysen i flere repetisjoner. Den innledende metoden ligner på den for å bestemme følsomhet for antibiotika. Først utføres en foreløpig mikroskopi av prøven, deretter primær såing på universelle næringsmedier. Deretter isoleres en renkultur på selektive næringsmedier.

Hovedarbeidet gjøres med renkultur. De behandles med forskjellige typer bakteriofager. Hvis kolonien oppløses (lyserer), indikerer dette høy aktivitet hos bakteriofagen. Hvis lysisen er delvis, fungerer bakteriofagen moderat. I fravær av lysis kan vi snakke om resistens mot bakteriofagen.

Fordelen med fagterapi er at bakteriofager ikke påvirker menneskekroppen og ikke forårsaker bivirkninger. De fester seg til visse typer bakterier og lyserer dem. Ulempen er at de er svært spesifikke og har en selektiv effekt, og kan ikke alltid feste seg til bakterier.

[ 30 ], [ 31 ], [ 32 ], [ 33 ], [ 34 ], [ 35 ], [ 36 ], [ 37 ], [ 38 ]

Sputumanalyse for antibiotikafølsomhet

Analysen er en studie av utskillelsen fra nedre luftveier. Målet er å bestemme typen mikroorganismer som utløser sykdommen. Det utføres også et antibiogram. I dette tilfellet bestemmes patogenets følsomhet for antibiotika, og den optimale konsentrasjonen velges. Det brukes ved sykdommer i luftveiene.

Undersøkelse av sputum og annet innhold i lunger og bronkier er nødvendig for å velge et behandlingsregime og for å differensiere ulike diagnoser. Den brukes til å bekrefte eller avkrefte forekomsten av tuberkulose.

Først er det nødvendig å innhente biologisk materiale. Det kan innhentes ved hoste, ved oppspytt eller ved å ta det fra luftrøret under bronkoskopi. Det finnes spesielle aerosoler som fremmer oppspytt. Før inntak av sputum, bør munnen skylles med vann, noe som vil redusere graden av bakteriell forurensning av munnhulen. Først anbefales det å ta 3 dype åndedrag og fremkalle en produktiv hoste. Sputum kan også tas ved aspirasjon fra luftrøret. I dette tilfellet settes et spesielt kateter inn i luftrøret. Under bronkoskopi settes et bronkoskop inn i bronkialhulen. I dette tilfellet smøres slimhinnen med et bedøvelsesmiddel.

Materialet sendes deretter til laboratoriet for testing. Standard såing og mikroskopi utføres. En renkultur isoleres deretter, og videre manipulasjoner utføres med den. Et antibiogram utføres, som gjør det mulig å identifisere spekteret av bakteriell følsomhet og velge optimal dosering.

Ved mistanke om tuberkulose undersøkes morgensputum i tre dager. Ved tuberkulosetest vil resultatet være klart om 3–4 uker. Siden mycobacterium tuberculosis, som er årsaken til sykdommen, vokser svært sakte.

Normalt bør representanter for normal mikroflora i luftveiene oppdages. Det er også nødvendig å ta hensyn til at indikatorene for normal mikroflora kan variere med redusert immunitet.

Sædanalyse for antibiotikafølsomhet

Det er en bakteriologisk studie av sædcellenes ejakulat med påfølgende valg av sensitive antibiotika og deres konsentrasjoner. Oftest utføres det i behandling av infertilitet og andre sykdommer i det mannlige reproduksjonssystemet. I tilfelle sykdommen er ledsaget av en infeksjonsprosess. Hovedårsaken til mannlig infertilitet er i de fleste tilfeller en infeksjon. Vanligvis utføres et spermogram først. Basert på resultatene fastslås sædcellenes befruktningsevne. Hvis et stort antall leukocytter finnes i denne analysen, kan vi snakke om en inflammatorisk prosess. I dette tilfellet foreskrives vanligvis en mikrobiologisk analyse umiddelbart, siden betennelse nesten alltid er ledsaget av en infeksjon. Basert på de oppnådde resultatene velges passende terapi. Studien foreskrives vanligvis av en androlog.

Prostatitt og kjønnssykdommer er også grunner til å utføre analysen. Den foreskrives også dersom en kjønnssykdom oppdages hos partneren.

Grunnlaget for en korrekt analyse er først og fremst riktig innsamling av biologisk materiale. Materialet samles opp i spesielle beholdere med bred hals. Lagringstemperaturen bør tilsvare menneskekroppens temperatur. I dette tilfellet kan materialet lagres i ikke mer enn en time. I frossen form kan det lagres i ikke mer enn en dag. Det er upassende å ta en dyrkning under inntak av antibiotika, dette endrer det kliniske bildet. Vanligvis tas dyrkningen før antibiotikabehandlingen starter. Eller slutt å ta medisiner 2-3 dager før analysen.

Deretter sås den på et næringsmedium. Inkuberes i en termostat i 1-2 dager. Deretter isoleres en renkultur, deretter utføres identifikasjon, følsomhet bestemmes, samt type og veksthastighet for hver koloni. Følsomhet for antibiotika bestemmes hvis patogene mikroorganismer oppdages. I gjennomsnitt tar analysen 5-7 dager.

[ 39 ], [ 40 ], [ 41 ], [ 42 ], [ 43 ]

Glutenfølsomhetstest

Det finnes mange tester som kan brukes til å bestemme immunologisk følsomhet for ulike stoffer eller patogener. Tidligere var hovedmetoden å utføre tester basert på agglutinasjonsreaksjonen til antistoffer og antigener. I dag brukes disse testene mindre og mindre, siden følsomheten deres er mye lavere enn mange moderne metoder, som glutentester. Oftest tyr de i praksis til en spyttprøve for gluten- og avføringsanalyse.

Glutenfølsomhetstesten brukes til å diagnostisere ulike tarmlidelser. Den er basert på immunsystemets reaksjon. Hvis gluten tilsettes avføringen, oppstår eller uteblir reaksjonen. Dette regnes som et falskt positivt eller falskt negativt resultat. Et positivt resultat indikerer en predisposisjon for kolitt, en høy sannsynlighet for utvikling av den. Det bekrefter også cøliaki.

Det er også mulig å utføre en glutentest med spytt som biologisk materiale. Det er mulig å måle mengden antistoffer mot gliadin. Et positivt resultat indikerer følsomhet for gluten. Dette kan indikere en høy sannsynlighet for diabetes. Hvis begge testene er positive, kan diabetes eller cøliaki bekreftes.

[ 44 ], [ 45 ]

Klamydiafølsomhetstest for antibiotika

Analysen utføres ved behandling av infeksjons- og inflammatoriske sykdommer i urogenitalkanalen, ved mistanke om klamydia. Materialet til studien er et skrap fra vaginalslimhinnen - hos kvinner, et utstryk fra urinrøret - hos menn. Innsamlingen utføres i prosedyrerommet med engangsutstyr. Det er viktig å opprettholde sterilitet. Før innsamling av materialet bør du avstå fra intimitet i 1-2 dager før studiestart. Hvis en kvinne har menstruasjon, samles materialet inn 3 dager etter at det er fullstendig avsluttet.

Materialet leveres til laboratoriet. En fullstendig analyse inkluderer en foreløpig mikroskopi av smearet. Dette gjør det mulig å visuelt bestemme mikrofloraen ved hjelp av morfologiske trekk og velge næringsmedier riktig. Innholdet av slim, puss og epitelpartikler kan direkte eller indirekte indikere utviklingen av en inflammatorisk prosess eller ondartet degenerasjon av celler.

Deretter utføres primærsåing. Kulturen inkuberes i flere dager i en termostat, og identifikasjon utføres basert på kulturkarakteristikker. Deretter overføres kulturen til selektive næringsmedier beregnet for dyrking av klamydia. De resulterende koloniene identifiseres ved hjelp av biokjemiske tester. Deretter bestemmes følsomheten for antibiotika ved hjelp av standardmetoder. Det mest følsomme antibiotikumet og dets konsentrasjon velges. Spesielle medier utviklet spesielt for denne typen mikroorganisme, som inneholder alle nødvendige stoffer og vekstfaktorer, er nødvendige for å dyrke klamydia.

Det er også mulig å gjennomføre en studie ved hjelp av en biologisk metode. For å gjøre dette infiseres rotter med patogenet. I noen laboratorier brukes en spesialdyrket vevskultur i stedet for rotter. Dette skyldes at klamydia er intracellulære parasitter, og spesielle forhold er nødvendige for dyrking av dem. Deretter bestemmes mikroorganismer ved hjelp av PCR-metoden. For å bestemme følsomhet transplanteres de til et selektivt næringsmedium for klamydia, og etter noen dager registreres resultatene. Resistens eller følsomhet bedømmes ved å undertrykke den smittsomme prosessen i cellene.

[ 46 ], [ 47 ], [ 48 ], [ 49 ], [ 50 ], [ 51 ], [ 52 ], [ 53 ]

Hvor lang tid tar det å gjøre en antibiotikafølsomhetstest?

I gjennomsnitt gjøres analysen innen 5–7 dager. Noen analyser tar lengre tid. For eksempel, når man diagnostiserer tuberkulose, må man vente fra 3 uker til en måned på resultatene. Alt avhenger av vekstraten til mikroorganismene. Ofte må laboratoriepersonalet håndtere saker der pasienter ber om at analysen skal gjøres raskere. Og de tilbyr til og med "tilleggsbetaling" for hastverk. Her må man imidlertid forstå at i dette tilfellet avhenger ingenting av laboratorieassistentens handlinger. Det avhenger bare av hvor raskt mikroorganismen vokser. Hver type har sin egen, strengt definerte vekstrate.

Normal ytelse

Det finnes ingen absolutte universelle normverdier for alle analyser. For det første kan disse verdiene variere for hver biotop. For det andre er de individuelle for hver mikroorganisme. Det vil si at normverdiene for den samme mikroorganismen, for eksempel for hals og tarm, er forskjellige. Så hvis stafylokokker dominerer i halsen som en representant for normal mikroflora, dominerer E. coli, bifido- og laktobakterier i tarmene. Verdiene for den samme mikroorganismen i forskjellige biotoper kan også variere betydelig. For eksempel kan Candida normalt være tilstede i en viss mengde i den urogenitale mikrofloraen. De er normalt ikke tilstede i munnhulen. Tilstedeværelsen av Candida i munnhulen kan indikere at de er kunstig introdusert fra sitt naturlige habitat.

Urin, blod og cerebrospinalvæske er biologiske miljøer som normalt sett skal være sterile, dvs. de skal ikke inneholde noen mikroflora. Tilstedeværelsen av mikroflora i disse væskene indikerer en sterk inflammatorisk, infeksiøs prosess, og indikerer også risiko for å utvikle bakteriemi og sepsis.

Generelt finnes det en omtrentlig klassifisering. Måleenheten i mikrobiologi er CFU/ml, det vil si antallet kolonidannende enheter i 1 milliliter biologisk væske. Forurensningsgraden bestemmes av antallet CFU og varierer i et bredt område fra 101 ^til 109. ^Følgelig er ¹⁰¹ minimumsantallet mikroorganismer, ¹⁰⁹ er en alvorlig infeksjonsgrad. Samtidig anses området opptil ^{103 som normalt, alle indikatorer over dette tallet indikerer patologisk reproduksjon av bakterier.}

Når det gjelder følsomhet for antibiotika, er alle mikroorganismer delt inn i resistente, moderat følsomme og følsomme. Dette resultatet uttrykkes ofte som en kvalitativ egenskap som indikerer MID - den minste hemmende dosen av antibiotikaen, som fortsatt hemmer veksten av mikroorganismen. For hver person, så vel som for hver mikroorganisme, er disse indikatorene strengt individuelle.

[ 54 ], [ 55 ], [ 56 ], [ 57 ]

Enheten for analyse

Når man utfører bakteriologiske studier, spesielt med bestemmelse av følsomhet for antibiotika, vil én enhet ikke være nok. Komplett og omfattende utstyr for det bakteriologiske laboratoriet er nødvendig. Det er nødvendig å nøye planlegge og velge utstyr som samsvarer med hvert trinn i forskningen. Ved innsamling av biologisk materiale er sterile instrumenter, esker, beholdere, oppbevaringskamre og transportutstyr for levering av materialet til laboratoriet nødvendige.

I laboratoriet trenger du først og fremst et mikroskop av høy kvalitet for smøremikroskopi. I dag finnes det et stort antall mikroskoper som har en rekke egenskaper - fra tradisjonelle lysmikroskoper til fasekontrast- og atomkraftmikroskoper. Moderne utstyr lar deg skanne et bilde i tredimensjonalt rom og undersøke det med høy forstørrelse med høy nøyaktighet.

I så- og inkubasjonsfasen for mikroorganismer kan det være nødvendig med autoklaver, tørrvarmeskap, eksikkatorer, dampbad og sentrifuge. Det kreves en termostat, der hovedinkubasjonen av biologisk materiale skjer.

I stadiet for identifisering av mikroorganismer og utføring av et antibiogram kan mikromanipulatorer, massespektrometre, spektrofotometre og kolorimetre være nødvendige for ulike beregninger og vurdering av kulturenes biokjemiske egenskaper.

I tillegg kan moderne laboratorier utstyres med høyteknologisk utstyr som utfører alle de ovennevnte hovedtrinnene i forskningen, helt opp til beregning av resultatene i automatisk modus. Slike enheter inkluderer for eksempel en kompleks enhet i et bakteriologisk laboratorium basert på et time-of-flight massespektrometer. Denne serien med enheter gjør det mulig å dele hele laboratoriets territorium inn i tre soner. Den første sonen er skitten, hvor tester mottas og registreres. Den andre sonen er arbeidssonen, hvor den viktigste mikrobiologiske forskningen faktisk utføres. Og den tredje sonen er sterilisering og autoklav, hvor forberedelse og avhending av arbeidsmateriale utføres.

Modellene tillater inkubasjon ved et bredt spekter av temperaturer og forhold. Inneholder en innebygd analysator for blod og andre biologiske prøver, som gir resultater med høy nøyaktighet og pålitelighet. Settet inkluderer elektroniske vekter, bidestillatorer, sentrifuger, autoklaver og steriliseringsskap, automatisk mediumkoker, vannbad med innebygd omrører, pH-målere, termometre og mikroskoper.

En mikrobiologisk analysator brukes også, hvor prøvene som skal testes, næringsmedier og sett med tester for å bestemme følsomhet plasseres. Enheten utfører de nødvendige studiene og kommer med en ferdig konklusjon.

Økning og senking av verdier

Bare en lege kan tyde analysen. Men ofte får pasienter panikk etter å ha mottatt resultatene og legger merke til et stort antall uforståelige symboler og tall. For ikke å gå seg vill, er det lurt å ha i det minste en generell ide om hvordan man skal tyde analysen av følsomhet for antibiotika. Vanligvis angir det første punktet i resultatene navnet på mikroorganismen som er årsaken til sykdommen. Navnet er gitt på latin. Det kan også indikere en representant for den normale mikrofloraen som råder i kroppen, så det er ingen grunn til panikk. Det andre punktet angir graden av såing, det vil si antall mikroorganismer. Vanligvis varierer dette tallet fra 10 ¹ til 10 ^9. Det tredje punktet angir formen for patogenitet, og det fjerde - navnene på antibakterielle legemidler som denne mikroorganismen er følsom for. Den minste hemmende konsentrasjonen, der veksten av mikroorganismen undertrykkes, er angitt i nærheten.

[ 58 ], [ 59 ], [ 60 ], [ 61 ], [ 62 ], [ 63 ]