Polymerasekjedereaksjon (PCR) ved diagnose av smittsomme sykdommer

PCR - en av de fremgangsmåter for DNA-diagnostikk som tillater å øke antallet kopier av en detekterbar del av genomet (DNA) av bakterier eller virus er en million ganger ved hjelp av en DNA-polymerase-enzym. En test for denne spesifikke genomisk nukleinsyresegment gjentatte ganger multiplisert (forsterket) som lar dets identifikasjon. Først, et DNA-molekyl av bakterier eller virus ved å varme delt i to kjeder, og deretter i nærvær av de syntetiserte DNA-primere (sekvens av nukleotider som er spesifikke for den definerte genomisk) får binde dem sammen med komplementære strekninger av DNA, syntetiseres den andre tråd av nukleinsyren etter hver primer i nærvær av en termostabil DNA-polymerase . To DNA-molekyler oppnås. Prosessen gjentas mange ganger. For diagnose bare ett DNA-molekyl, dvs. En bakterie eller virus-partikkelen. Omsetning av et ytterligere trinn - DNA-syntese på den RNA-molekyl ved hjelp av enzymet revers transkriptase - har gjort det mulig å teste RNA-virus slik som HCV virus. PCR - tre-trinns prosess, i gjentatte sykluser med denaturering, annealing av primerne, DNA-syntese (polymerisering). Den syntetiserte mengden av DNA er identifisert ved ELISA eller ved elektroforese.

PCR kan bli anvendt i forskjellig biologisk materiale - serum eller blodplasma, skraping av urinrøret, biopsi, pleuralvæske, cerebrospinalfluid etc. Den første PCR ble brukt for diagnostisering av smittsomme sykdommer som viral hepatitt B, hepatitt C virus, virushepatitt D, CMV-infeksjon, infektiøs seksuelt overførbar infeksjon (gonoré, søppel diynaya, mykoplasma, ureaplasma infeksjon), tuberkulose, HIV- -infeksjon, etc.

Fordelen med PCR ved diagnostisering av smittsomme sykdommer over andre undersøkelsesmetoder er som følger:

• Infeksjonsårsaksmidlet kan finnes i et hvilket som helst biologisk miljø i kroppen, inkludert materialet oppnådd ved biopsi;
• Det er mulig å diagnostisere smittsomme sykdommer i de tidligste stadiene av sykdommen;
• En kvantitativ evaluering av resultatene av forskningen er mulig (hvor mange virus eller bakterier er inneholdt i det undersøkte materialet);
• høy følsomhet av metoden; f.eks følsomhet av PCR for påvisning av DNA av hepatitt B-virus i blodet er 0,001 pg / ml (ca. 4 x 10 ² kopier / ml), mens følsomheten for en DNA-hybridisering metode under anvendelse av forgrenede prober - 2,1 pg / ml (ca. 7 × 10 ⁵ kopier / ml).

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8]