Medisinsk ekspert av artikkelen
Nye publikasjoner
PCR som en metode for å diagnostisere genetiske sykdommer
Sist anmeldt: 23.04.2024
Alt iLive-innhold blir gjennomgått med medisin eller faktisk kontrollert for å sikre så mye faktuell nøyaktighet som mulig.
Vi har strenge retningslinjer for innkjøp og kun kobling til anerkjente medieområder, akademiske forskningsinstitusjoner og, når det er mulig, medisinsk peer-evaluerte studier. Merk at tallene i parenteser ([1], [2], etc.) er klikkbare koblinger til disse studiene.
Hvis du føler at noe av innholdet vårt er unøyaktig, utdatert eller ellers tvilsomt, velg det og trykk Ctrl + Enter.
PCR er en ny prestasjon i molekylær genetikk, brukt til DNA-amplifikasjon og tillater at den spesifikke delen av DNA (det vil si et hvilket som helst gen av interesse) raskt repliseres in vitro mer enn 200.000 ganger. For å utføre reaksjonen er det tilstrekkelig å ha DNA-materialet i en celle; mengden av DNA forsterket av PCR er så stor at dette DNAet enkelt kan bli farget (ved bruk av radioaktive prober etter elektroforese er ikke nødvendig). En forutsetning for å utføre PCR er kjennskapen til nukleotidsekvensen av den amplifiserte DNA-regionen for riktig utvalg av kunstig syntetiserte primere.
For tiden er en PCR-prosess som forekommer i et enkelt rør og som består av gjentatte sykluser med amplifikasjon (reproduksjon, kopiering) av spesifikke DNA-sekvenser for å oppnå et tilstrekkelig stort antall kopier som kan identifiseres ved hjelp av elektroforese. En nøkkelkomponent i reaksjons - "primere" - syntetiske oligonukleotider som består av 20-30 baser av komplementære "områder" (områder) annealing (tilkobling) til den identifiserbare del av templat-DNA.
PCR går automatisk i en programmerbar termostat - termocykler (termocykler). Tre-trinns syklusen, som et resultat av hvilken de nøyaktige kopier av den identifiserbare delen av mal-DNA er oppnådd, gjentas 30-50 ganger i samsvar med det forhåndsinnstilte programmet til termocykleren. I den første syklusen hybridiserer oligopramerne med det originale mal-DNA, og deretter (i etterfølgende sykluser) og med de nylig syntetiserte DNA-molekylene som de akkumulerer i reaksjonsblandingen. I det sistnevnte tilfellet, ikke DNA-syntese ikke ende på grunn av temperaturendringer, og ved å nå det amplifiserte DNA-polymerase grenseområde, som bestemmer størrelsen av det nylig syntetiserte DNA-region til innenfor ett nukleotid.
Som en metode for å detektere de oppnådde DNA-molekyler, anvendes elektroforese, ved hjelp av hvilket det amplifiserte materiale deles i henhold til størrelsen av amplikoner (amplifikasjonsprodukter).
Ved hjelp av PCR er det mulig å undersøke lokaliseringsstedene for formodede mutasjoner eller polymorfe områder, og også å studere tilstedeværelsen av andre spesifikke egenskaper av DNA.
[