Medisinsk ekspert av artikkelen
Nye publikasjoner
PCR som metode for diagnostisering av genetiske sykdommer
Sist anmeldt: 04.07.2025
Alt iLive-innhold blir gjennomgått med medisin eller faktisk kontrollert for å sikre så mye faktuell nøyaktighet som mulig.
Vi har strenge retningslinjer for innkjøp og kun kobling til anerkjente medieområder, akademiske forskningsinstitusjoner og, når det er mulig, medisinsk peer-evaluerte studier. Merk at tallene i parenteser ([1], [2], etc.) er klikkbare koblinger til disse studiene.
Hvis du føler at noe av innholdet vårt er unøyaktig, utdatert eller ellers tvilsomt, velg det og trykk Ctrl + Enter.
PCR er en ny bragd innen molekylær genetikk, brukt til DNA-amplifisering og muliggjør rask in vitro- multiplikasjon av en spesifikk DNA-region (dvs. et hvilket som helst gen av interesse) mer enn 200 000 ganger. For å utføre reaksjonen er det nok å ha DNA-materiale fra én celle; mengden DNA amplifisert ved PCR er så stor at dette DNA-et enkelt kan farges (bruk av radioaktive prober etter elektroforese er ikke nødvendig). En forutsetning for å utføre PCR er kunnskap om nukleotidsekvensen til den amplifiserte DNA-regionen for riktig valg av kunstig syntetiserte primere.
For tiden er PCR en enkeltrørsprosess som består av gjentatte sykluser med amplifisering (reproduksjon, kopiering) av en spesifikk DNA-molekylsekvens for å oppnå et tilstrekkelig stort antall kopier som kan identifiseres ved elektroforese. En av nøkkelkomponentene i reaksjonen er "primere" - syntetiske oligonukleotider som består av 20–30 baser komplementære til "stedene" (områdene) for annealing (festing) på det identifiserte området av matriks-DNA-et.
PCR skjer automatisk i en programmerbar termostat – en termisk sykler (forsterker). Tretrinnssyklusen, som resulterer i eksakte kopier av den identifiserte delen av matriks-DNA, gjentas 30–50 ganger i samsvar med det spesifiserte termiske syklerprogrammet. I den første syklusen hybridiserer oligoprimere med det opprinnelige matriks-DNA-et, og deretter (i påfølgende sykluser) med nylig syntetiserte DNA-molekyler etter hvert som de akkumuleres i reaksjonsblandingen. I sistnevnte tilfelle avsluttes DNA-syntesen ikke som et resultat av en temperaturendring, men når DNA-polymerasegrensen for den amplifiserte delen nås, noe som bestemmer størrelsen på den nylig syntetiserte DNA-delen med en nøyaktighet på ett nukleotid.
Elektroforese brukes som en metode for å detektere de oppnådde DNA-molekylene, ved hjelp av hvilken det amplifiserte materialet separeres i henhold til størrelsen på amplikonene (amplifikasjonsproduktene).
PCR kan brukes til å direkte undersøke plasseringen av mistenkte mutasjoner eller polymorfe steder, samt til å studere tilstedeværelsen av andre spesifikke DNA-funksjoner.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]