Hemopoietiske stamceller av navlestrengsblod

Navelstrengblod fungerer som en kilde til hematopoietiske stamceller på det proliferative potensialet og repopulasjonsevnen til hematopoietiske celler. Det har blitt gjentatte ganger vist at navlestrengsblodet på leveringstidspunktet inneholder et tilstrekkelig stort antall dårlig begavede hematopoietiske stamceller. Noen forfattere mener at fordelen med stamcelletransplantasjon fra navlestrengsblod er ikke nødvendig å finne en donor kompatibel for HLA-antigener. Ifølge dem, umodenhet den nyfødte immunsystem fører til redusert funksjonell aktivitet av immunkompetente celler og følgelig lavere enn i benmargstransplantasjon, forekomsten av alvorlig reaksjon "transplantat versus vert". I denne celle transplantasjon overlevelse av navlestrengblod er ikke lavere enn benmargceller, selv i tilfellet med bruk av et mindre antall av GSK administrert per 1 kg pasientvekt. Imidlertid, etter vår mening, det optimale antallet spørsmål transplantert ledningen blodcellene som er nødvendig for effektiv innpodning i kroppen til mottakeren, deres immunologiske kompatibilitet, og en rekke andre aspekter ved transplantasjon av hematopoietiske stamceller fra navlestrengblod krever mer alvorlige analyse.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Oppnå hematopoietiske stamceller av navlestrengsblod

Fremgangsmåten for oppnåelse av hematopoetiske stamceller fra navlestrengblod krever sin innsugnings- umiddelbart etter fødselen og dens separering fra placenta, når placenta er in utero eller ex utero, samt for keisersnitt, men også ex utero. Det er vist at i tilfelle av reduksjon i tiden fra fødselen til separasjon av det nyfødte fra moderkaken til 30 sekunder øker volumet av ledningsblod som oppnås i gjennomsnitt med 25-40 ml. Ved en senere prosedyre går samme mengde blod tapt. Det er fastslått at tidlig separasjon av barnet fra etterbrenningen ikke medfører noen negative konsekvenser for nyfødte.

Den russiske Research Institute of Haematology and Blood Transfusion utviklet effektive og rimelige teknologi for både ledningen blod ved fysiologiske linjene ((70,2 + 25,8) ml) og keisersnitt ((73.4 + 25.1) ml). En fremgangsmåte for separasjon av navlestrengsblod med et tilstrekkelig høyt utbytte av mononukleære celler og kjernedannelse - (83,1 + 9,6) og (83,4 + 14,1)%, henholdsvis. Forbedret metode for kryokonservering av ledningen blod, noe som sikrer høy sikkerhet av mononukleære celler og CFU-GM - (96,8 + 5,7) og (89,6 + 22,6)%, henholdsvis. Effektiviteten av dreneringsmetoden for blodblodprøve med "Kompoplast-300" -beholderen (Russland) ble bestemt. Gjerde navlestrengsblod forfatterne utføres umiddelbart etter fødsel, og dens separering fra placenta, når det gjelder å plassere placenta in utero eller ex utero. Før punktering av navlevenen navlestreng en gang behandlet med 5% jodtinktur, og deretter to ganger - 70% etylalkohol. Blodet strømmet gjennom forbindelsesrørene til beholderen spontant. Varigheten av gjerdet tok ikke mer enn 10 minutter. 66 oppsamlede tappevolumet metode umbilikal blodprøver midlet (72 + 28) ml, og antallet av leukocytter i prøven gjennomsnitt fullt - (1,1 + 0,6) x x 107. Analysen av navlestrengsblod for sterilitet (bakteriell kontaminering HIV-1-virus av hepatitt B og C, syfilis, og cytomegalovirus infeksjon) i bare én prøve ble identifisert IgG-antistoffer mot hepatitt C i en annen studie gang placenta etter fødselen foster overflate ble plassert på en spesiell ramme nedad, ledningen ble behandlet med 5% natrium jod og 75% etyl th alkohol. Vene i navlestrengen ble drenert med en nål fra transfusjonssystemet (G16). Blodet drenerte seg i beholderen spontant. Volumet av blod tatt på denne måten i gjennomsnitt (55 + 25) ml. Papiret G. Kogler et al (1996) navlestrengsblod tatt lukket måte og fås store mengder blod - gjennomsnitt (79 + 26) ml. Forfatterne merke seg at blant 574 ledningen blodprøver inneholde omtrent 7% mindre enn 40 ml blod, som ikke tillater å bruke dem for transplantasjon. K. Isoyama et al (1996), idet det i ledningen blod ved aktiv exfusion ved hjelp av sprøyter, mottok et gjennomsnitt på 69,1 ml blod (blodvolum ledningen varierte fra 15 til 135 ml). Til slutt ble A. Abdel-Mageed PI medarbeidere (1997) ved punovinnoy vene kateterisering ble oppnådd i gjennomsnitt 94 ml ledningen blod (fra 56 til 143 ml).

For å redusere risikoen for iatrogene infeksjon og forurensning av maternal sekreter utviklede lukket system blodsamling basert på den mye brukte transfuzioinoy system Baxter Healthcare Corp., Deerfield, Illinois (USA), inneholdende 62,5 ml CPDA (citrat-fosfat-dekstrose med adenin) i form antikoagulant. Teknologien for å skaffe materialet er av største betydning for fremstilling av en kvalitativ prøve med hensyn til volum, innhold og renhet av cellesuspensjonen. Av eksisterende metoder for ledningen blodoppsamling kotoryeuslovno klassifisert i lukket, halv-åpen og åpen system sleduetotdavat preferanse først, som i et lukket system i betydelig grad reduserer risikoen for mikrobiell forurensning av materialet, såvel som forurensning av cellesuspensjonen av modercellen.

A. Nagler og medforfattere (1998) gjennomførte en komparativ analyse av effekten av alle tre blodblodprøvingssystemer. I den første varianten ble prosedyren utført i et lukket system ved eksfusjon av blod direkte inn i beholderen. I den andre varianten ble ledningsblod oppnådd ved fremgangsmåten for aktiv blodutfusjon av sprøyter1 med ytterligere vask av venene på placenta og samtidig drenering av blod inn i beholderen (åpen metode). I den tredje varianten ble blodet trukket tilbake i et semi-åpent system ved aktivt å ekstrahere det med sprøyter og vaske gjennom navlenes navlestreng med samtidig eksfusjon i beholderen. I den første versjonen fikk forfatterne navlestrengsblod i volumet (76,4 + 32,1) ml med et leukocyttall (10,5 + 3,6) x 10 ⁶ pr 1 ml blod. I den andre utførelsesform er de tilsvarende tall (174,4 + 42,8) og ml (8,8 + 3,4) x 10 ⁶ / ml; i den tredje - (173,7 + 41,3) ml og (9,3 + 3,8) x 10 ⁶ / ml. Den hyppigste infeksjonen av navlestrengsblodprøver ble observert ved bruk av et åpent system. En direkte sammenheng mellom modermasse og volumet av ekstrahert blod er etablert - med økende modermasse øker mengden blod som samles opp.

Etter prøvetaking av navlestrengsblod følger separasjonstrinnet isolasjon av mononukleære celler og rensing av cellesuspensjonen fra erytrocytter. Under eksperimentelle betingelser isoleres de nukleerte celler ved fremgangsmåten for deres sedimentering med metylcellulose under lysis av ammonium erythrocytter med klorid. For kliniske formål bør imidlertid ikke metylcellulose brukes, siden tapet av hematopoietiske stamceller når 50-90%. Å lysere røde blodceller i forbindelse med store volumer av arbeidsoppløsningen i klinikken også neppe gjennomføres, selv om prosentandelen av separasjon på denne måte nukleære celler med fenotype av CD34 +, og progenitorceller CFU-GM-funksjoner og CFU-GEMM betydelig høyere. En ny agent for isolering av mononukleære celler i tetthetgradient buyant density solution (BDS72) er rapportert. Dette stoffet har følgende fysiologiske parametere: pH - 7,4, osmolalitet - 280 mosm / kg, tetthet - 1,0720 g / ml. Ifølge forfatterne, med hjelpen er det mulig å isolere opptil 100% av CD34-positive celler og fjerne 98% av røde blodlegemer. Men klinikken gjelder ennå ikke BDS72.

Separasjonsmetodene som ble testet nukleære celler fra navlestrengblod er typisk brukt en 10% HES oppløsning eller 3% gelatinløsning. Effektiviteten av utfelling av erytrocytter og isolering av kjernefysiske celler i begge tilfeller er omtrent like. Når imidlertid gelatin brukes som sedimenteringsmiddel, er det imidlertid mulig å oppnå en noe større mengde CFU-GM enn med hydroksyetylstivelse. Det antas at forskjellen i utvinningsutbyttet CFU-GM ulik hastighet på grunn av avsetning av individuelle fraksjoner eller celler med kjerne evne HES molekyler absorberes på hematopoietiske celleoverflatereseptorer og blokkerer således deres følsomhet for kolonistimulerende faktorer, som brukes ved dyrking av CFU-GM in vitro. Likevel kan begge sedimenter godt være egnet for å isolere kjernefysiske celler når de oppretter storskala blodbaner.

Metoder for separasjon og kryopreservering av navlestrengsblod i prinsippet avviger ikke fra de som brukes i arbeidet med hematopoietiske stamceller av perifert blod og benmarg av voksne donorer. Men når man forbereder et stort antall navlestrengsblodprøver for sine banker, må separasjonsmetoder først og fremst være lave kostnader. Derfor, for kliniske behov som allerede er benyttet, er det allerede brukt rutinemetoder for isolasjon og kryopreservering av navlestrengsblodceller, og mer effektive, men økonomisk effektive metoder forblir mange eksperimenter.

Samlet evalueringskriterier etablert seg hematopoetiske celletall krav og til studiet av ledningen blodprøver for å påvise smittestoffer. For å sikre transplantasjon av hematopoietiske blodblodceller, må alle blodprøver undersøkes primært for hematogene infeksjoner og genetiske sykdommer. Noen forfattere anbefale ekstra spesielle metoder for studiet av navlestreng blod for det formål å diagnostisere genetiske sykdommer som thalassemia og sigdcelleanemi, adenosindeaminase mangel, agammaglobulinemia Bruton, sykdom Harlera og punter.

I henhold til anbefalingene Ticheli L. Et al (1998), i hver prøve av navlestrengblod er nødvendig for å bestemme antall celler med kjerne, SB34-positive celler og CFU-GM, bærere av HLA-typing for å bestemme blodgruppen ABO og Rh medlemskaps. I tillegg er såing utføres bakteriologiske, serologiske tester for HIV og CMV-infeksjon, HBsAg, hepatitt C, HTLY-I og HTLV-II (T-celle leukemi, menneske), syfilis, toksoplasmose. En polymerasekjedereaksjon på cytomegalovirus og HIV-infeksjon er obligatorisk.

Selve prosedyren for å skaffe ledningsblod bør utføres i henhold til prinsippene for medisinsk bioetikk. Før begynnelsen av blodsamlingen er det nødvendig å få samtykke fra den gravide kvinnen til gjennomføringen. Foreløpig intervju med en gravid kvinne for å få informert samtykke til å utføre alle manipulasjoner, fra blodeksfusjon til ferdigstillelse av dokumentasjon, utføres kun av medisinsk personell. I alle fall avvises å utføre noen av disse fremgangsmåtene av personell med biologiske, kjemiske, farmasøytiske og andre ikke-medisinsk utdannelse, i betraktning av brudd på etablerte normer for bioethics og menneskerettigheter. For positive tester for bære HBsAg, antistoffer mot det forårsakende middel for hepatitt C, HIV og syfilis ledningen blod tatt ikke, og de oppsamlede blodprøver allerede er kassert og ødelagt. Det bør bemerkes at transporten av latente infeksjoner i nyfødte er mye sjeldnere enn hos voksne, og derfor er sannsynligheten for hematogenous overføring og utvikling av infeksiøse komplikasjoner av hematopoietiske infusjoner av ledningen blodceller er betydelig lavere enn i tilfellet med transplantasjon av benmarg fra voksne givere.

Et viktig punkt for påføring av ledningen blod i klinikken er evalueringen av transplantatet, som er basert på kvantifisering av hematopoetiske stamceller i en prøve av ledningen blodceller, og de doser som er nødvendig for transplantasjon. Standarder for optimal antall navlestrengsblodceller som kreves for transplantasjon, er ennå ikke utviklet. Det er ikke noe generelt akseptert synspunkt selv på slike rutineparametere som antall CD34-positive celler og CFU-GM. Noen forfattere evaluert potensialet av hematopoetiske celler ved analyse av de langtidskulturer med bestemmelse av innholdet av kolonidannende enheter som er felles for granulocytter, erytrocytter, monocytter og megakaryocytter - CFU-GEMM.

I kliniske sammenhenger inkluderer imidlertid standardvurderingen av blodtransplantasjon i blodet vanligvis bare bestemmelsen av antall kjerne- eller mononukleære celler.

Lagring av hematopoietiske stamceller av navlestrengsblod

Noen problemer eksisterer i teknologien for lagring av blodceller fra hematopoietiske ledninger. Når cryokonservering av hematopoetiske stamceller for å oppnå sin optimale fryse modus må minimere mengden av ledningen blod og røde blodceller ble fjernet tidligere for å unngå hemolyse og risikoen for inkompatibilitetsreaksjonen av erytrocyttantigener (ABO, Rh). For disse formål er forskjellige metoder for isolering av kjernefysiske celler egnet. I de tidlige 90-tallet av forrige århundre den mest brukte metode for separering av celler med kjerne i en densitetsgradient basert på Ficoll med en tetthet på 1,077 g / ml, eller perkolering med tetthet 1,080 g / ml. Separasjon ledningen blod ved densitetsgradient gjør det mulig å velge hovedsakelig mononukleære celler, men fører til betydelige tap av hematopoetiske progenitorceller - opp til 30-50%.

Sedimenteringseffektiviteten av hydroksyetylstivelse i prosessen med isolering av navlestrengsblodceller er estimert på forskjellige måter. Noen forfattere indikerer en lav separasjonsgrad ved hjelp av denne metoden, mens andre forskere, tvert imot, blant alle mulige metoder foretrekker å tildele HSC-streng blod nøyaktig ved hjelp av en 6% løsning av hydroksyetylstivelse. Dette fremhever den høye effektiviteten av sedimentering av hemopoietiske celler, som ifølge noen data når fra 84% til 90%.

Tilhengere av et annet synspunkt synes det nesten alle fraksjoneringsprosesser involverer store tap yadrosoderzhashih celler og tilby å gjøre separasjon ved sentrifugering, separering av ledningen blod inn i 3 fraksjoner: erytrocytt, leukocytt og plasma ring. Separering av celler på denne måte, har oppfinnerne funnet at innholdet av mononukleære celler i tidlige hematopoietiske forløperceller og celler med CD34 + immunfenotypen slutt var henholdsvis 90, 88 og 100% av det opprinnelige nivå. Lignende mengder av renset vekst i denne metoden for navlestreng blod celler oppnådd av andre forskere: etter sedimentering med kjerne, bevilget 92%, 98% - mononukleær, 96% - CD34-positive celler og 106% av kolonidannende enheter.

På slutten av 1990-tallet ble gelatin mye brukt som sedimenteringsmiddel. I klinisk praksis, ved bruk av gelatin hematopoetiske stamceller isolert fra navlestrengsblod siden 1994. Ved bruk av en 3% løsning av gelatin når effektiviteten av isolering av kjernefysiske celler 88-94%. Den utbredte bruken av gelatin i utviklingen av ledningsblodbanken har bekreftet fordelene sine over andre sedimenteringsmidler. Sammenlignende analyse av alle de ovennevnte fremgangsmåter for isolering av kjerneinneholdende celler i forhold til deres sekvensiell anvendelse i hver av de testledning blodprøver viste at de optimale sedimenter ut mononukleære celler med fenotype CD34 + / CD45 +, samt av antall CFU-GM og CFU-GEMM er 3% gelatineoppløsning. Det viste seg å være betydelig mindre effektive metoder ved anvendelse av Ficoll densitetsgradient, og bruk av metyl-cellulose og hydroksyetyl-stivelse, hvor hematopoetisk celle tap nådde 60%.

Utvidelsen av volumet av stamcelletransplantasjon av navlestrengsblod er ikke bare forbundet med utviklingen av metoder for deres produksjon, men også lagring. Det er mange problemer som er direkte relatert til fremstilling av navlestrengsblod for langtidslagring og valg av optimal kryopreserveringsteknologi for sine prøver. Blant dem er problemene med hensikten med å utføre separasjonsprosedyrer, bruken av forskjellige kryopreserveringsmedier og bruken av metoder for å forberede fortøyd celler til transplantasjon. Transport av innfødte prøver av ledningsblod utføres ofte fra områder fjernt fra hematologiske sentre. I forbindelse med dette oppstår problemet om de permitterte perioder for lagring av ledningsblod fra øyeblikk av kvitteringen til begynnelsen av kryopreservering, noe som er av særlig betydning for utviklingen av ledningsblodbanker.

Studiet av den funksjonelle aktiviteten til hematopoetiske ledningen blodlegemer etter langtidslagring (opp til 12 år) i flytende nitrogen viste at omtrent 95% av hematopoetiske celler i løpet av denne tiden ikke miste sin høye formeringsevne. Papiret Yurasova S. Et al (1997) viste at ledningen blod lagret ved romtemperatur (22 ° C) eller ved 4 ° C i 24 og 48 timer ikke i vesentlig grad reduserer levedyktigheten av de hematopoetiske celler som det opprinnelige nivå, er hensiktsmessig 92 og 88%. Men hvis lagringstiden forlenges til tre dager, reduseres antallet levedyktige kjernefysiske celler i ledningsblodet betydelig. Samtidig ble det funnet at i løpet av 2-3 dager ved en temperatur på 22 eller 4 ° C, vil levedyktigheten av modne granulocytter, i stedet for hematopoietiske celler, primært påvirke.

Løseligheten av hematopoietiske stamceller i ledningsblod kan påvirkes negativt av systemkomponenter for innsamling. Analyse av effekten av forskjellige antikoagulanter, som virkningsmekanisme er på grunn av binding av kalsiumioner (ACD, EDTA, XAPD-1) for hematopoetiske forløperceller i ledningen blodlagringsbetingelser på 24 til 72 timer viste deres negative innvirkning på levedyktigheten av celler med kjerne. I denne forbindelse, forfatterne anbefaler bruk av PBS (fosfatbufferløsning) med tilsetning av nativt heparin uten konserveringsmiddel i en konsentrasjon på 20 U / ml, som i deres mening, gjør det mulig å øke varigheten av lagrings ufraksjonert ledningen blod opp til 72 timer, og lagrer den funksjonelle aktiviteten til kolonidannende enheter. I studiet av bevaring CFU-GM og CFU-G vist at navlestrengsblod lagringstid før nedfrysing bør ikke overstige ni timer. Selvfølgelig, i dette tilfellet bør opptre prinsippet om at hvis det er motstridende data bør bruke den laveste anbefalte ledningen blod lagringstid og starte en programmerbar fryse isolerte celler så raskt som mulig.

Ved frysning av hematopoietiske stamceller av navlestrengsblod, brukes en 10% løsning av DMSO vanligvis som kryobeskyttende middel. Imidlertid har, i tillegg til den uttrykte kryobeskyttende effekt, dimetylsulfoksyd i denne konsentrasjon en direkte cytotoksisk effekt, selv under betingelse av minimal eksponering for bloddannende celler i navlestrengsblodet. For å redusere den cytotoksiske effekten av DMSO påføres en null eksponeringstemperatur, en økning i hastigheten på alle manipulasjoner og gjentatt vask etter tining av navlestrengsprøver.

Institutt for hematologi og transfusiologi fra Academy of Medical Sciences of Ukraine har utviklet en vitenskapelig retning siden 1995, hvis mål er å studere ledningsblodet som en alternativ kilde til stammehemopoietiske celler. Spesielt er det utviklet ny teknologi for lavtemperaturkryopreservering av hemopoietiske celler av ufraksjonert og fraksjonert ledningsblod. Som en kryobeskyttende middel brukes medisinsk polyvinylpyrrolidon med lav molekylvekt. Metoden for kryopreservering av ufraksjonert ledningsblod er basert på den opprinnelige teknologien for forberedelse av celler for frysing og teknikken for spesiell behandling av cellesuspensjon umiddelbart før transplantasjon.

En av de viktigste faktorene som påvirker nivået av funksjonell aktivitet av kryopreserverte hemopoietiske stamceller er kjølehastigheten av cellepensjon, spesielt under krystallisasjonsfasen. En programvare tilnærming til å løse problemet med hastighet og tid for frysing gir gode muligheter for å lage enkle og svært effektive metoder for kryopreservering, uten å vaske cellesuspensjonen fra krybeskyttende midler før transplantasjon.

Stadier av umiddelbar frysing og tining er farlig for cellers levedyktighet under forberedelsen. Når de hemopoietiske cellene fryses, kan en signifikant del av dem ødelegges i øyeblikket ved overgang av det intercellulære medium fra væsken til fastfase-krystallisasjonen. For å redusere prosentandelen av celledød brukes kryobeskyttende midler, virkningsmekanismer og kryobeskyttende effektivitet er dekket tilstrekkelig i den vitenskapelige litteraturen.

En lovende retning optimaliseringsteknikker for kryokonservering av benmarg og navlestreng blod celler er å kombinere i den samme oppløsning til lave konsentrasjoner av kryobeskyttelsesmidler med flere forskjellige virkningsmekanismer, for eksempel, som virker på den intracellulære nivå av DMSO og hydroksyetylstivelse eller albumin som innehar ekstracellulære omsluttende virkning.

For nedfrysing av ledningen blod celler blir tradisjonelt brukt 20% DMSO-løsning som er permanent mekanisk omrøring i et isbad, ble langsomt helt over i cellesuspensjonen for å oppnå lik (1: 1) volumforholdet mellom cellesuspensjonen og kryobeskyttelsesmiddel. Den endelige konsentrasjonen av dimetylsulfoksid er 10%. Cellesuspensjonen ble avkjølt på et program med en hastighet krioustanovke HS / min til -40 ° C, hvoretter kjølehastigheten ble øket til 10 ° C / min. Etter å ha nådd -100 ° C plasseres beholderen med cellesuspensjonen i flytende nitrogen (-196 ° C). Med denne metoden for kryokonservering når sikkerheten til funksjonelt aktive mononukleære celler etter opptining 85% av opprinnelsesnivået.

Modifikasjoner av kryopreserveringsmetoder er rettet mot å redusere konsentrasjonen av DMSO ved å tilsette hydroksyetylstivelse (sluttkonsentrasjoner av dimetylsulfoksid og hydroksyetylstivelse er henholdsvis 5% og 6%). Høy effektivitet av denne kombinasjonen av kryobeskyttende midler blir observert når suspensjonen av myeloidceller er frosset, med ikke mindre cytoproteksjon enn med en enkelt 10% løsning av dimetylsulfoksid. Antallet levedyktige nukleerte celler nådde 96,7% av basisnivået, og deres funksjonelle aktivitet, beregnet ved antall CFU-GM, var 81,8%.

Ved bruk av dimetylsulfoksyd oppløsning i konsentrasjoner som varierer fra 5 til 10% i kombinasjon med 4% hydroksyetylstivelse (sluttkonsentrasjon) funnet at bevaring av CD34-positive celler i disse områder dimethylsulfoxyd praktisk talt uforandret. Samtidig, under forhold med redusert dimetylsulfoksidkonsentrasjon fra 5 til 2,5%, observeres massetap av navlestrengsblodceller - antall levedyktige celleenheter reduseres fra 85,4 til 12,2%. Andre forfattere konkluderte også med at det var 5 og 10% oppløsning av dimetylsulfoksyd (i det copyright utførelsesform - i kombinasjon med autologt serum) med maksimal effektivitet gi cytobeskyttelse under nedfrysing av ledningen blod HSC. I tillegg har høy sikkerhet sekvensielt frosset og opptint celle er markert i tilfellet med kombinasjonen av 5 eller 10% DMSO 4% hydroksyetylstivelse løsning, spesielt ved en kontrollert avkjølingshastighet på TOS / min. I et annet papir som brukes kryobeskyttende oppløsning bestående av tre bestanddeler som allerede er - DMSO, renset humant albumin, og RPMI-medium i et forhold på 1: 4: 5, ble tilsatt til cellesuspensjonen opp til en lik volumforhold (endelig DMSO-konsentrasjon var 5%). Etter opptining i et vannbad ved en temperatur på + 4 ° C oversteg sikkerheten til CFU-GM 94%.

Noen forfattere antyder bruk av ufraksjonert ledningsblod for kryopreservering, siden betydelige mengder hematopoietiske celler går tapt under fjerning av røde blodlegemer. I denne utførelsesformen anvendes en 10% løsning av dimetylsulfoksid for å beskytte mononukleære celler fra de skadelige virkningene av kryokrystallisering. Frysing utføres ved en konstant kjølehastighet på minst 60 ° C, hvorefter suspensjonen av navlestrengsblodceller blir nedsenket i flytende nitrogen. Med denne metoden for frysing finner en delvis lys av erytrocytene sted, derfor trenger blodprøver ikke fraksjonering. Etter opptining vaskes cellesuspensjonen fra fritt hemoglobin og dimetylsulfoksid i en oppløsning av humant albumin eller i det autologe serum av pasienten og brukes til transplantasjon.

Bevaring av blodkreft stamceller etter tining ufraksjonert ledningen blod er faktisk høyere enn fraksjonert, men i forbindelse med krioustoychivostyu av de røde blodcellene kan føre til alvorlige problemer som følge av post-transfusjon Transfusjon av ABO-inkompatibelt røde celler. I tillegg øker volumet av lagret ufraksjonert blod betydelig. Fra et klinisk synspunkt, enda mer foretrukket kryopreservering tidligere isolert og renset fra andre cellulære fraksjoner av ledningen blod hematopoetiske celler.

Spesielt er en fremgangsmåte cryokonservering av ledningen blod celler fraksjonert slik at fjerne erytrocytter i forberedelse for frysing, som bruker en 6% oppløsning av hydroksyetyl-stivelse i blandingen plazmozameshchath løsning "Stabizol". Etter opptining er cellesuspensjonen således oppnådd klar til klinisk bruk uten ytterligere manipulasjon.

Således er det for tiden mange ganske effektive måter å kryopreservere navlestrengsblod. Hovedforskjellen er at blodprøver frosses ufraksjonert eller underkastes separasjon i cellefraksjoner under preparatstrinnet og høstet kjernefysiske celler uten en blanding av erytrocytter.

Transplantasjon av hemopoietiske stamceller av navlestrengsblod

På slutten av 80-tallet - tidlig på 90-tallet i forrige århundre ble det funnet at navlestrengsblod som leverer fosteret under graviditeten, er preget av et høyt innhold av hematopoietiske stamceller. Den relative enkelheten ved å skaffe navlestrengsblodceller og fraværet av åpenbare etiske problemer fremmer bruken av blodblodstamceller i praktisk medisin. Den første vellykkede transplantasjonen av ledningsblod til et barn med Fanconi-anemi fungerte som utgangspunkt for å utvide volumene av blodblodstamcelletransplantasjon og skape et system for bankavsetningen. I det globale systemet med ledningsblodbanker er den største New York Center for Placental Blood, som står på balansen for National Institutes of Health. Antall lagrede blodprøver i denne banken nærmer seg 20 LLC. Antall mottakere (hovedsakelig barn) vokser også, og vellykket transplantasjon er utført. Ifølge det amerikanske departementet for helse har den tilbakefallsfrie perioden etter transplantasjonslivet til mottakere av HSC-blodblod allerede overskredet 10 år.

Dette er ikke overraskende, så mange studier av blodkreft potensialet i navlestrengsblod har vist at mengden og kvaliteten på de tidligste stamcellene ikke bare er ikke dårligere enn et voksent menneske benmarg, men også av enkelte tiltak overskride den. En høyere proliferativ potensial på stamceller fra navlestrengsblod ga utviklingscellesignale funksjoner, nærværet av reseptorer på HSCs til bestemte vekstfaktorer, kapasiteten på ledningen blodceller til autokrin produksjon av vekstfaktorer, den store størrelsen og lengden på telomerer.

Således bestemmer genomiske og fenotypiske egenskaper av stambloddannende navlestrengsblodceller den kvalitative engraftment av en transplantasjon med høyt potensial for restaurering av donorhemopoiesis i mottakerorganismen.

Fordeler med hematopoietiske stamceller av navlestrengsblod

Blant de virkelige fordelene ved bruk av blodkreft stamceller fra navlestrengsblod for transplantasjon i forhold til andre kilder til hematopoetiske celler Det bør bemerkes nesten null risiko for helsen til donor (hvis ikke regnes som en slik placenta), mens de eliminerer behovet for generell anestesi. Bruken av navlestreng blodcelletransplantasjon utvider seg som følge dels av HLA-kompatibelt pode system (uforlikeligheter fra ett til tre antigener). Teknikken for langtidslagring av hematopoetiske ledningen blodlegemer i en frossen tilstand, noe som øker sannsynligheten for å få sjeldne HLA-type og reduserer søketiden HLA-matchet allogen transplantasjon. Samtidig reduseres risikoen for å utvikle noen latente infeksjoner som overføres av overføringsruten betydelig. I tillegg er det en billig form for biologisk livsforsikring i forbindelse med muligheten for å bruke ledningsblodceller til autolog transplantasjon.

Imidlertid, fordi små volumer av blod som kan bli samlet inn fra placenta (et gjennomsnitt på ikke mer enn 100 ml) i forgrunnen problemet med å oppnå den maksimalt mulige mengde av blod fra navlestreng vene i strengt samsvar med betingelsene for minimal risiko for bakteriell forurensning av navlestreng blod avledet prøver.

Primitive hematopoetiske celler fra navlestrengblod er generelt identifisert ved nærvær på overflaten glikofosfoproteina CD34, og på grunnlag av deres funksjonelle egenskaper ved å undersøke klonogen analyse eller kolonidannelse in vitro. Sammenlignende analyser viste at det i ledningen blod og benmarg maksimalt innhold av CD34-positive mononukleære celler i fraksjon er henholdsvis 1,6 og 5,0%, det maksimale nivået av kolonidannende enheter i en subpopulasjon av CD34 + celler - 80 og 25%, total kloningseffektiviteten av CD34 + P-celler - 88 og 58%, den maksimale kolonidannende celler med høy proliferativ potensial (HPP-CFC i -populyatsii CD34 +) - 50 og 6,5%. Det skal tilføyes at den kloningseffektiviteten av CD34 + CD38-celler og evnen til å reagere på cytokin-stimulering også høyere i hematopoetiske stamceller fra navlestrengsblod.

Kombinasjons fenotypiske antigener Thy-1, CD34 og CD45RA bekrefter den høye formeringsevne av ledningen blod hematopoetiske celler, og ekspresjon av de tre antigener på overflaten av ledningen blod celler indikerer at de tilhører den stamcelle. I tillegg har det blitt fastslått at ledningsblod inneholder celler med en CD34 + fenotype som ikke har lineære differensieringsmarkører. Nivået i navlestrengsblod av celleunderpopulasjoner med fenotypisk profil av CD34 + / Lin er ca. 1% av det totale antall CD34-positive celler. Hematopoetiske progenitorceller gi opphav til ledningen blod som en lymfoide cellelinjer, og et antall lineære pluripotent myeloid celledifferensiering, noe som også indikerer at de hører til stamcellene.

Som nevnt er de vesentlige forskjellene mellom beinmarg og ledningsblod mengden hematopoietiske celler som brukes til transplantasjon, oppnådd med en fremgangsmåte. Når benmargstransplantasjon tap av cellemasse i separasjonsprosessen, kryopreservering, tining og testing er tillatt i størrelsesorden 40-50%, er ledningen blodceller slik tap meget viktig, ettersom ved bruk av tilstrekkelig mange HSC transplantasjon kan være uholdbar. I henhold til G. Kogler et al (1998), for celletransplantasjon i mottakerkroppsvekt på 10 kg potensiell transplanterte (totalt antall av de innsamlede ledningen blodprøver - 2098) kan være alle ledningen blodprøver, kroppsvekt 35 kg - 67%, og bare 25% av prøvene vil kunne gi effektiv transplantasjon hos pasienter med en kroppsvekt på 50-70 kg. Denne kliniske situasjonen indikerer behovet for å optimalisere og forbedre effektiviteten av eksisterende metoder for prøvetaking, reproduksjon og lagring av navlestrengsblodceller. Derfor er spørsmål om standardisering av prøvetakingsmetoder, testing, separasjon og nedfrysing av ledningen blod er nå vidt diskutert i litteraturen for dannelse av blodbanker, dens anvendelse i klinikken, samt etablere de vilkår og betingelser for lagring av hematopoetiske stamceller fra navlestrengsblod.

[7], [8], [9],

Bruk av hematopoietiske stamceller av navlestrengsblod i medisin

Vanligvis kan opptil 10 ⁶ hematopoietiske stamceller isoleres fra navlestrengsblod , sjelden mer. I forbindelse med dette, frem til i dag, gjenstår spørsmålet om tilførselen til så mange blodceller for hematopoietisk ledd for å gjenopprette hematopoiesen hos den voksne mottakeren. Meninger om dette problemet ble delt. Noen forskere tror at denne mengde er tilstrekkelig for transplantasjons barn, men for liten til å transplantere voksent menneske, for hvilken administreringen er optimal (7-10) x 10 ⁶ CD34-positive celler per 1 kg kroppsvekt - gjennomsnitt på 7 x 10 ⁸ per transplantasjon. Fra disse beregningene følger det at en navlestrengsprøve inneholder 700 ganger mindre hematopoietiske stamceller enn nødvendig for en transplantasjon til en voksen pasient. En slik kvantitativ vurdering utføres imidlertid analogt med antall transfusjonerte celler i beinmargen og ignorerer helt de ontogenetiske egenskapene til hematopoiesis.

Ignorerer særlig det faktum at høyere formeringsevne av hematopoetiske stamceller for ledningen blod sammenlignet med hematopoietiske forløperceller i benmargen. Resultatene av in vitro-studien med kolonidannende potensial antyder at en enkeltdose ledningsblod kan gi en rekonstituering av hematopoiesen til den voksne mottakeren. På den annen side bør vi ikke glemme at antall HSCs avtar selv i ferd med embryoutvikling: innholdet av CD34-positive celler i navlestrengblod er lineært redusert 5 ganger i en periode på 20 uker (blod for studien ble oppnådd i tilfelle av for tidlig avslutning av svangerskapet) til 40 ukers svangerskap (perioden for fysiologiske fødsler), som er ledsaget av en parallell, permanent økning i uttrykket av lineære cytodifferentieringsmarkører.

På grunn av mangelen på en standardisert tilnærming til kvantifiseringen av stamceller i navlestrengsblodprøver fortsetter kontroversen over den optimale dosen av hematopoietiske blodblodstamceller. Noen forskere mener at antallet kjernefysiske celler og mononukleære celler, beregnet på nytt for kroppens vekt av mottakeren, det vil si deres dose, kan brukes som kriterier for valg av navlestrengsprøver. Noen forfattere mener at den minste kvantitative terskelen for CD34 + -celler, selv for å utføre autolog transplantasjon av HSC, er 2 x 10 ⁶ / kg. Den økning av dosen av hematopoetiske celler til 5 x 10 ⁶ celler / kg (totalt 2,5) gir allerede en mer egnet for tidlig etter transplantasjonen, reduserer forekomsten av infeksiøse komplikasjoner og forkorter periode på forebyggende antibiotikabehandling.

I henhold til E. Gluck et al (1998) i hematologi for vellykket transplantering av navlestreng blodceller er det innføring av i det minste 3,7 x 10 ⁷ celler med kjerne per 1 kg kroppsvekt av mottageren. Med en reduksjon i dosen av hematopoietiske stamceller til 1 x 10 ⁷ og mindre kjernefysiske celler per 1 kg kroppsvekt, øker risikoen for graftfeil og tilbakefall av kreft kraftig. Det skal anerkjennes at det minste antall stamceller som er nødvendige for rask gjenoppretting av hemopoiesis etter GSG-allotransplantasjon, ikke er kjent. Teoretisk kan dette oppnås ved hjelp av en enkelt celle, men i klinisk benmargstransplantasjon rask og stabil innpodingen garantert transfusjon i det minste (1-3) x 10 ⁸ celler med kjerne per 1 kg av pasientens kroppsvekt.

En nylig detaljert studie for å bestemme den optimale mengden HSC i onkohematologi inkluderte observasjonen av pasienter av tre grupper isolert avhengig av innholdet av CD34-positive celler i transplantasjonsmaterialet. Pasientene ble gitt den første gruppe (3-5) x 10 ⁶ celler / kg. GSK dose hos pasienter i den andre gruppen utgjør (5-10) x 10 ⁶ celler / kg, og den tredje gruppen av pasienter transplantert mer enn 10 x 10 ⁶ CD34 + celler / kg. De beste resultater ble observert i gruppen av mottagere som var behandlet med den pode antall CD34-positive celler var lik (3-5) x 10 ⁶ / kg. Med økende doser av transplanterte celler enn 5 x 10 ⁶ / kg statistisk signifikante fordeler har blitt identifisert. Således meget store innholds HSCs i transplantasjon (> 10 x x 10 ⁶ / kg) ble forbundet med en betydelig mengde av gjenværende reinfusjon av tumorceller, noe som fører til tilbakefall av sykdommen. Det var ikke noe direkte forhold mellom antall transplanterte allogene stamceller og utviklingen av "graft versus host" reaksjonen.

Den akkumulerte verdensopplevelsen av transplantasjon av HSC-strengeblod bekrefter deres høye repopulasjonspotensial. Engraftment-hastigheten på ledningens blodtransplantasjon korrelerer med antall innførte nukleerte celler. De beste resultatene observeres med en transplantasjon på 3 × 10 ⁷ / kg, mens for benmargen er denne dosen 2 × 10 ⁸ / kg. Ifølge dataene fra koordinasjonssentrene ble i slutten av 2000 1200 transplantasjoner av navlestrengsblodceller laget i verden, hovedsakelig fra donorrelaterte (83%). Tydeligvis bør ledningsblod betraktes som et alternativ til beinmarg for transplantasjon til pasienter med hemoblastose.

Imidlertid neonatal natur Cordova kilde av hematopoietisk vev oppmuntrende på grunn av nærværet av funksjonelle funksjoner i sin GCW. Imidlertid kan bare klinisk erfaring gi et svar på spørsmålet om tilstrekkeligheten av en prøve av navlestrengsblod for voksen hematopoietisk rekonstitusjon av mottakeren med aplasi av hematopoiesis. Transplantasjon av ledningen blod celler blir brukt i behandling av mange sykdommer i tumor og ikke-tumor natur: leukemi og myelodysplastisk syndrom, ikke-Hodgkins lymfom, og neuroblastom, aplastisk anemi, medfødt fanconi anemi og Diamond Black vifte, mangel av leukosyttadhesjon, Barr syndrom, Gunther sykdom Harlera syndrom, thalassemi .

Nøye oppmerksomhet og separat forskning fortjener de immunologiske aspektene ved transplantasjon av bloddannende celler i navlestrengsblod. Det er vist at i tilfellet med transplantasjon av stamceller fra navlestrengsblod fra donorer med ufullstendige HLA-tilpasset transplantasjon resultater er ganske tilfredsstillende, som, ifølge forfatterne, hvilket indikerer en lavere immunoreaktivitet navlestrengsblod enn benmarg.

Et detaljert studium av den cellulære sammensetnin av navlestrengsblod viste funksjonene til både fenotypiske spekteret av effektor celler i immunsystemet og deres funksjonelle aktivitet, slik at for å vurdere ledningen blod som en kilde til HSCs med forholdsvis lav risiko for reaksjon "transplantat versus vert". Ytterligere har en funksjonell umodenhet immunkompetente ledningen blodceller bør bemerkes ubalanse av cytokin produksjon, og en minskning i følsomhet for cytokiner ny regulering av immunresponsen. Den resulterende inhiberingen av cytotoksisk lymfocyttaktivitet anses å være en faktor som bidrar til dannelsen av immunologisk toleranse for det transplanterte hemopoietiske vevet. I navlestrengs blodlymfocyttpopulation, i motsetning til perifert blod og benmarg av voksne donorer, dominerer inaktive, umodne lymfocytter og suppressorceller. Dette indikerer en redusert tilgjengelighet av blodblod T-lymfocytter til immunresponsen. Et viktig trekk ved monocyttpopulationen av navlestrengsblodceller er det lave innholdet av funksjonelt kompliserte og aktive antigen-presenterende celler.

På den ene siden, en lav grad av modenhet av effektor celler i immunsystemet i ledningen blod opplesninger strekker seg til dens anvendelse i klinikken, da disse funksjonene kan reduksjonen i intensitet av immun konflikt mellom giver- og mottakercellene. Men, på den annen side, vi vet om eksistensen av en sammenheng mellom graden av reaksjon "graft versus host sykdom" og transplantasjon antitumor effekt, det vil si effekten av utviklingen av "graft-versus-leukemi". I forbindelse med dette ble det utført en undersøkelse av antitumoral cytotoksisitet av navlestrengsblodceller. Resultatene viser at, til tross for den virkelig svekket immunresponsen hos ledningen blodceller til antigenstimulering, aktivert i første omgang er de naturlige dreperceller og killeropodobnymi celler som er aktivt involvert i mekanismene for gjennomføring av anti-tumor cytotoksisitet. Videre, i ledningen blod lymfocytsubpopulasjoner ble funnet med fenotypen CD16 + CD56 + og CD16 "TCRa / p +. Det antas at disse cellene er i en aktivert form gjennomføre reaksjon" graft-versus-leukemi".

Ved Institutt for Oncology, Academy of Medical Sciences i Ukraina cryopreserved hematopoetiske celler fra navlestrengsblod ble gitt til kreftpasienter med vedvarende hypoplasi av hematopoiesis grunn av kjemoterapi og strålebehandling. I disse pasientene, transplantasjon av hematopoietiske stamceller fra navlestrengsblod effektivt gjenopprettet blod undertrykkelse, slik det fremgår av vedvarende forhøyelse av modne dannede elementer i perifert blod, så vel som en økning i indikatorer som karakteriserer den tilstand av cellulær og humoral immunitet. Stabilitet av repopulasjonseffekten etter transplantasjon av bloddannende celler i navlestrengsblod tillater fortsatt stråling og kjemoterapi uten å avbryte behandlingsforløpet. Det er bevis for større effektivitet allograft-stamcelle ledningen blod kreftpasienter: årlig risiko for tilbakefall av en tumor i deres bruk var 25% mot 40% i pasienter med et transplantert allogen benmargs genet.

Virkningsmekanismen av kryokonserverte stamceller fra navlestrengsblod bør betraktes som resultatet av en humoral stimulering av hematopoiesis mottakere forårsaket av den unike evnen til neonatal celler til autokrin produksjonen av hematopoietiske vekstfaktorer, så vel som en følge av den midlertidige innpoding av donorceller (som en bekreftelse - en betydelig økning i innholdet av perifert blod føtalt hemoglobin mottaker 7-15 th dagen etter blodtransfusjon sammenlignet med baseline). Fravær i mottakere av ledningen blod post-transfusjonsreaksjoner - på grunn av dens relative toleranse av immunceller, så vel som tillit kriterium nytten av kryokonserverte biologisk materiale.

Progenitorceller T-lymfocytter spekk navlestrengsblod i stand til aktivering under påvirkning av eksogen stimulering cytokin som blir brukt for å utvikle nye ex vivo og in vivo metoder for å indusere anti-tumor cytotoksisk lymfoide celler for etterfølgende transplantasjon immunoterapi. I tillegg er "umodne" av genomet av navleblodimmunceller muliggjør deres anvendelse for å forbedre antitumoraktivitet ved molekylær modellering.

I dag har ledningsblod funnet bred anvendelse primært i pediatrisk hematologi. Hos barn med akutt leukemi allotransplantasjon av hematopoetiske stamceller for ledningen blod sammenlignet med benmarg allografter, reduserer forekomsten av reaksjons "graft versus host" betydelig. Imidlertid er det bemerket i løpet av en lang periode med neutropeni og trombocytopeni, og dessverre et høyere nivå av den 100 dagers mortalitet etter transplantasjon. En lengre periode med bedring i de perifere blod granulocytter og blodplater kan skyldes utilstrekkelig differensiering av individuelle subpopulasjoner av CD34-positive celler fra navlestrengblod, som vist ved det lave nivå av absorpsjon av radioaktivt rhodamin og lav ekspresjon av CD38-antigener på deres overflate.

På samme tid, transplantasjon av hematopoietiske stamceller fra navlestrengblod fra voksne pasienter, utført på grunn av mangel på både en kompatibel ubeslektet benmargsdonor, samt muligheter for å mobilisere autologt HSC viste høy årlig tilbakefall overlevelse hos pasienter i alderen under 30 år (73%) . Ekspansjon mottaker aldersgruppe (18-46 år) ble redusert overlevelse til 53%.

Kvantitativ analyse av celler med fenotype CD34 + benmarg og ledningen blod viste høyere (3,5 ganger) sitt innhold i benmargen, men navlestrengsblod viste en betydelig overvekt av celler med fenotype-profilen til CD34 + HLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi markørene CD34 + HLA-DR spre seg mer aktive enn celler med immunfenotypen CD34 + HLA-DR +, som bekreftet i eksperimentelle studier av veksten av langtidskultur av hematopoetiske celler in vitro. Primitiv celle progenitorceller med fenotypen CD34 + CD38 som finnes i ledningen blod og benmarg, men navlestreng blod celler med markøren satt CD34 + CD38 ha høyere aktivitet enn klonogen hematopoietiske celler av samme fenotype, isolert fra voksen donor benmarg. I tillegg vil navlestreng blod celler med CD34 + CD38 immunfenotypen proliferere i respons til stimulering med cytokiner (IL-3, IL-6, G-CSF) og reprodusere 7 ganger flere kolonier i de langvarige kulturer enn benmargceller.

Banker av ledningsblodstamceller

For riktig utvikling av det nye feltet praktisk medisin - transplantasjon av stamceller fra navlestrengsblod, samt å utføre transplantasjoner av blodkreft benmarg stamceller, må du ha et omfattende nettverk av blodbankene, som allerede er etablert i USA og Europa. Intra-statlige nettverk av ledningsblodbanker er forenet av Association of Netcord Banks. Mulighetene for å realisere en internasjonal organisasjon av ledningen blodbanker bestemmes av det faktum at for å utføre urelaterte transplantasjoner trenger et stort antall prøver av navlestrengsblod skrevet, slik at for å velge den HLA-identisk donor. Bare etablering av et system av banker med lagring av blodprøver av forskjellige HLA-typer i dem kan virkelig løse problemet med å finne den nødvendige donoren. Organiseringen av et slikt system av ledningsblodbanker krever en foreløpig utvikling av etiske og juridiske normer, som for tiden drøftes på internasjonalt nivå.

For å skape ledningsblodbanker i Ukraina er det nødvendig å utarbeide en rekke bestemmelser og dokumenter.

Først av alt er det spørsmål om standardisering av prøvetaking, fraksjonering og frysing av navlestrengsblod. Det er nødvendig å regulere navlestreng blodoppsamlings- regler i sykehus, i samsvar med kravene legeetiske, for å bestemme den minimale mengde av navlestrengsblod, noe som gir en vellykket transplantasjon. Det bør sammenlignes og standardisering av forskjellige kriterier for evaluering av kvaliteten og antallet av hematopoetiske progenitorceller, samt HLA-typing metoder og fremgangsmåter for diagnose av genetiske og smittsomme sykdommer som kan overføres ved infusjon av navlestreng blodceller angi generelle utvelgelseskriterier friske donorer. Det er også verdt å diskutere opprettelsen av separate lagringsanlegg for serum, celler og DNA som er avledet fra ledningsblod.

Det er absolutt nødvendig å organisere et datanettverk med data om ledningsblod for implementering av forholdet til registerene av benmargsgivere. For videreutvikling av celletransplantasjon behov for å utvikle spesifikke protokoller som sammenligner resultatene av transplantasjon av navlestreng blod og benmarg fra HLA-identiske slektninger og relaterte donorer. I håndteringen av etiske og juridiske problemer av klinisk bruk av ledningen blod celler kan hjelpe standardisere dokumentasjon, herunder informert samtykke fra foreldrene, samt varsel om mor eller slektninger av barnet identifiseres av genetiske og / eller smittsomme sykdommer.

Den avgjørende forutsetning for utvikling av celletransplantasjon i Ukraina vil være innføringen av det nasjonale programmet for donasjon av stamceller og utvikling av internasjonalt samarbeid med andre land gjennom World Association of donor benmarg (WMDA), National amerikanske donor benmarg program (NMDP) og andre registre.

General fortsatt kort historie om stamcelletransplantasjon fra navlestrengsblod, ser vi at den første antakelsen om muligheten for klinisk anvendelse av navlestrengsblod, laget i begynnelsen av 70-tallet, ble bekreftet i de 80 årene resultatene fra eksperimentelle studier på dyr, og i 1988 året har vært gjennomført verdens første transplantasjon av hematopoetiske celler av menneskelig navlestrengsblod, og deretter begynte å utvikle et globalt nettverk av ledningen blod banker. Etter 10 år har antallet pasienter med transplanterte hematopoetiske celler, navlestrengsblod nærmere til 800. Blant dem var pasienter med forskjellige tumor sykdommer (leukemi, lymfom, faste tumorer) og ikke-tumor (medfødt immunsvikt, anemi, sykdommer assosiert med metabolske sykdommer) natur.

I leddblod er innholdet i tidlige og engasjerte celleforløpere høyere enn i den perifere blod av en voksen. Ved antall granulocyt-makrofag-kolonidannende enheter og deres proliferative potensial, overskrider navlestrengsblod signifikant det perifere blod av voksne selv etter innføring av vekstfaktorer. I langsiktige cellekulturer in vitro var det en større proliferativ aktivitet og levedyktighet av navlestrengsblodceller enn benmargsceller. De kritiske øyeblikk i transplantasjon av navlestrengen Stamceller er hematopoetiske potensielle antall og kjerneinneholdende celler, tilstedeværelse av cytomegalovirus infeksjon, HLA-kompatible donor og mottaker, kroppsvekt og alder på pasienten.

Likevel bør stamceltransplantasjon av navlestrengsblod betraktes som et alternativ til benmargstransplantasjon for å behandle alvorlige blodsykdommer, særlig hos barn. Kliniske problemer med transplantasjon av navlestreng blodceller etter hvert løst - det allerede er ganske effektive prøvetakingsteknikker, separasjon og nedfrysing av ledningen blodceller, forutsatt at betingelsene for dannelsen av ledningen blodbanker, blir testmetodene forbedret kjerneinneholdende celler. Optimal separasjon i løpet av de store preform navlestrengsblod hematopoetiske stamceller in etablering av bredden bør betraktes som en 3% oppløsning av gelatin og 6% hydroksyetylstivelse løsning.

Perehrestenko P. Et al (2001) med rette påpeke at transplantasjon av stamceller fra navlestrengsblod skal ta sin rettmessige sted i det komplekse terapeutiske tiltak for å overvinne den nedtrykking av hematopoiesis av forskjellig opprinnelse, som GSK ledningen blod varierer i en rekke betydelige fordeler, blant hvilke viktig er det relativt enkelt å høsting, det er ingen risiko for donor, lav forurensning av neonatale celler med virus og relativt lave kostnader for transplantasjon. Noen forfattere foreslår at transplantasjon av navlestreng blod celler sjeldnere enn benmargceller er ledsaget av komplikasjoner forbundet med reaksjonen av "transplantat versus vert", som er på grunn, i deres syn, en svak ekspresjon i ledningen blod celler av HLA-DR antigener og deres umodenhet. Ikke desto mindre, det største populasjonen av celler med kjerne fra navlestrengblod er T-lymfocytter (SDZ-positive celler), der innholdet er omtrent 50%, som er 20% mindre enn i det perifere blod hos en voksen, men de fenotypiske forskjeller i subpopulasjoner av T-celler fra disse kilder er ubetydelig.

Blant de faktorer som direkte påvirker overlevelsen av stamcelletransplantasjon fra navlestrengsblod, bør vi merke en alder av pasientene (de beste resultater ses i mottakerne alderen opp til 5 år), tidlig diagnose av sykdommen, og en form for leukemi (effektivitet er vesentlig høyere i akutt leukemi). Av stor betydning er dosen av nukleerte navlestrengsblodceller, samt deres HLA-kompatibilitet med mottakeren. Det er ingen tilfeldighet analyse av den kliniske effekten av ledningen blod transplantasjon GSK i onkologi og hematologi viser de beste resultatene av behandling ved bruk av beslektede transplantasjoner: ett-års sykdomsfri overlevelse i dette tilfelle når 63%, mens det ubeslektede transplantasjon - bare 29%.

Tilstedeværelsen av et stort antall stamceller i ledningen blod og høy repopulyatsionnaya evne neonatale hematopoetiske stamceller gjør dem egnet for allogen transplantasjon til pasienter med ondartede hematologiske tilstander. Vær imidlertid oppmerksom på at reprisen av hematopoiesis etter transplantasjon av hematopoietiske stamceller fra navlestrengsblod "er strukket i tid": gjenopprette innhold i perifert blod nøytrofile inntreffer vanligvis mot slutten av den sjette uken, og trombocytopeni fenomenet forsvinner vanligvis etter 6 måneder. I tillegg vil umodne bloddannende celler fra navlestrengblod ikke ekskludere immunologisk konflikt: alvorlig forløp av akutt og kronisk reaksjon "graft versus host" observert i henholdsvis 23 og 25% av mottakerne. Relapses av akutt leukemi ved slutten av det første året etter transplantasjon av navlestrengsblodceller er notert i 26% av tilfellene.

[10], [11]