Diagnose av herpes

Diagnose av herpes er basert på utførelsen av den klassiske virustap i sensitive cellekulturer, immunfluorescens og serologiske metoder, gjennomfører colposcopic studier ved anvendelse av moderne molekylærbiologiske metoder (PCR, dot-hybridiseringen), noe som gjør det mulig å diagnostisere alle herpesvirus-gruppen, inkludert HHV-6 og HHV-7 typer.

Metoder for laboratoriediagnose av herpesinfeksjon

De viktigste metodene sikte på å utskille HSV eller påvise viruspartikler og / eller deres komponenter	Hjelpemetoder rettet mot å detektere antistoffer mot HSV i biologiske væsker i menneskekroppen
Isolering av HSV i sensitive kulturer av celler og dyr Direkte og immun-elektronmikroskopi Direkte og indirekte MFA-alternativer IFA Molekylære biologiske metoder Latex agglutineringsreaksjon	Nøytraliseringsreaksjon RSK Bestemmelse av antistoffer mot ikke-strukturelle proteiner av HSV-1,2

Det er vist at 76% av pasientene har kjønnsherpes (GH) forårsaket av HSV-2, og i 24% - HSV-1-type. Og GG som monoinfeksjon skjedde kun hos 22% av pasientene, i 78% av tilfellene ble mikrobielle foreninger oppdaget. Hos 46% av pasientene ble det observert parasitokenose forårsaket av to patogener, inkludert klamydia ble påvist i 40% av tilfellene. Mindre ofte i smørene bestemte Gardnerelly, Trichomonas, Gonococci.

I 27% av pasientene var parasitocenose representert ved tre og 5,2% av fire patogener. Dessuten ble en kombinasjon av klamydia med Gardnerella og sopp av slekten Candida oftere notert. Disse data rettferdiggjøre behovet for en inngående bakteriologisk undersøkelse av pasienter YY for å identifisere de patogene middelkombinasjoner, samt fordypning av patogenesen av blandede infeksjoner i urinveiene, noe som ville gjøre det mulig for en differensiert kompleks behandling av HSV-infeksjon.

Materialer som skal undersøkes ved isolering av HSV, avhengig av lokalisering av herpetic lesjoner

Lokalisering av lesjoner	Innhold av vesikler	Celleskraping				SMZ	Aspirere fra bronkiene	Biopsiprøve	Blod
		1	2	3	4
Lær	+								+
øyne			+						+
Genitalia				+					+
Anus	+				+				+
Munn	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Lunger		+					+		+
Leveren								+	+
Medfødt herpes	+	+	+				+		+

Metoder for laboratoriediagnose av cytomegalovirusinfeksjon

Fremgangsmåter	Tid kreves for å få resultater	Notater
Virologisk
Elektronmikroskopi	3 timer	Malodostupen
Isolering av viruset i cellekultur (CPD)	4-20 dager	Standard, Langsom
Immunfluorescensfarging av tidlig AH med monoklonale antistoffer	6 timer	Mindre spesifikk
TSITOLOGICHESKIY	2-3 timer	Mindre spesifikk
SEROLOGICHESKIY
RSK	2 dager	Standard
Ssubsistence	1 dag	Tidkrevende
RIF	6 timer	Enkel, spesifikk
NRIF	6 timer	Komplekse
RIMF	6 timer	Komplekse
IFA (IgM, TO)	6 timer	Rask, enkel
Immunoblot	6 timer	Dyrt
Molekylærbiologiske
MG	5-7 dager	Dyrt, tidkrevende
PCR	3 timer	Dyrt

Metoder for diagnostisering av herpes zoster-viruset

Diagnostiske metoder	laboratoriemetoder
INDIREKTE
Tildeling	Stoffkultur, kyllingembryoer, laboratoriedyr, samdyrking med permissive celler eller hjelpervirus
Identifikasjon av isolater	Nøytraliseringsreaksjon, DSC, IF, IPPE, reaksjon av utfellingsisolater, agglutinering, IF
RETT
Cytologi	Smears: farge immunofluorescens
Histologi	Pathomorfologi av cellen
Struktur	Embryonisk mikroskopi, immunoelektronisk mikroskopi
Bestemmelse av antigener	IF, PIÉF, RIM, IFA
Bestemmelse av lokal produksjon av antistoffer	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Molekylære biologiske tilnærminger	Molekylær hybridisering, PCR

Laboratoriediagnose av infeksjon forårsaket av herpes zoster-viruset

Diagnostiske problemer	Fremgangsmåter	Forventede resultater
Akutt primær infeksjon	1	Påvisning etter 2 timer
	2	Antistoffnivået vokser sakte
	3	Til stede 3 dager etter infeksjon
Akutt reaktivisert infeksjon	1	Deteksjon av ULV om 2 timer
	2	Antistoffnivået vokser sakte
	4	Present 4 dager etter utseendet av utslett

1. bestemmelsen i væsken av vesikler av WIEF;
2. serologi: DSC, ELISA, rettet mot å identifisere
3. serologi: ELISA, rettet mot å detektere IgM;
4. serologi: ELISA, rettet mot å detektere IgA, IgM.

Metoder for å indikere immunresponsen av en infeksjon på grunn av herpes zoster-viruset

Tilnærming	Metode
Påvisning av økt antistoff titer i den andre sera	RSK, RTGA, RPGA, nøytraliseringsreaksjon IF, RIM, ELISA
Påvisning av Ig G, Ig En klassespesifikk antistoff i den første serumprøven	IFA, IF, RIM, latex-agglutinering

Tolkning av resultater av serologisk undersøkelse av pasientsera på herpesvirusinfeksjoner (ELISA)

Navn på infeksjon / markør	Gjennomsnittlige terskler for infeksjoner
	Analyse resultater	Tolkning
Cytomegali Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Positive 1-6 Positive 6-10 Positive> 10 Negative Positive 100-300 Negative <90 Tvilsomme 90-100	Remission Forbedring av sykdommen Akutt fase av sykdommen Ingen infeksjon (sykdom) Akutt fase av sykdommen Gjenta analysen etter 2-3 uker
Herpes enkle 1,2 serotyper Anti-HSV 1/2 totalt. (100-900%)	Positiv 100-400 Positiv 400-800 Positiv> 800 Negativ <100	Remission Forbedring av sykdommen Akutt fase av sykdommen Ingen infeksjon (sykdom)

Tabellen presenterer de viktigste metodene for laboratoriediagnostikk av herpesvirusinfeksjoner, og anbefaler også biologiske materialer som studeres i isolering av HSV, idet man tar hensyn til lokalisering av herpetic lesjoner

Pålitelig er tildelingen av herpes simplex og CMV gjennom infeksjon av følsomme cellekulturer. Ved virologisk undersøkelse av 26 pasienter i løpet av gjentakelse ble HSV således isolert i en sensitiv Vero-cellekultur i 23 tilfeller (88,4%). I infiserte kulturer ble det observert et mønster av cytopatisk virkningskarakteristisk for HSV-dannelsen av multinukleerte gigantiske celler eller akkumuleringen av avrundede og forstørrede celler i form av klaser. I 52,1% av tilfellene var det mulig å påvise foci av den cytopatiske effekten av viruset ved 16-24 timer etter infeksjon. Ved 48-72 timer inkubering av infiserte kulturer økte andelen av materialer som forårsaket spesifikk celle ødeleggelse til 87%. Og bare i 13% av tilfellene ble positive resultater oppdaget 96 timer etter infeksjon og mer eller med gjentatt passasje.

Metoder for laboratoriediagnose av generell herpesinfeksjon

De viktigste metodene var rettet mot deteksjon (isolering) av herpesvirus, partikler og komponenter	Hjelpemetoder rettet mot å detektere antistoffer mot herpesvirus i biologiske væsker, oppdage enzymatiske skift i blodserum
Isolering av Herpes-virus på mottagelige cellekulturer og dyr direkte og immunelektronmikroskopi Direkte og indirekte immunoperoksydase metode utførelser Direkte og indirekte teknikk med fluorescerende antistoff alternativer alternativer ELISA utførelsesformer av molekyl (DNA-DNA-hybridiserende) Polymerase Chain Reaction Reaction lateksagglutinering	Nøytralisering reaksjon komplementfiksering reaksjon lateksagglutinering indirekte fluorescerende antistoff metode utførelse Indirekte immunoperoksydase-metode-variant Utførelser ELISA- metode immunblotting radial fiksering av komplement Metode Bestemmelse av alanin og aspartat nivåer

Serologiske metoder brukes til å diagnostisere smittsom mononukleose (infeksjon forårsaket av VEB). Reaksjonen av Paul Bunnel med erytrocyter av en ram, en diagnostisk titer på 1:28 og høyere med en enkelt studie av serum, eller en 4 ganger økning i antistoffer ved undersøkelsen av parret sera. Bruk Goff-Bauer-reaksjonen med en suspensjon av 4% formaliserte røde blodceller fra hesten. Resultatet er tatt i betraktning etter 2 minutter, med infeksiøs mononukleose er reaksjonen svært spesifikk.

For tiden utvikles et enzymimmunoassay (ELISA) for å diagnostisere smittsom mononukleose. I dette tilfelle bestemmes IgG- og IgM-antistoffer i pasientens serum ved å inkuberere det med lymfoblaster infisert med EBV, etterfulgt av behandling med fluorescerende antistoffer. I den akutte perioden av sykdommen bestemmes antistoffer mot viruskapsidantigenet i en titer på 1: 160 og over.

Ved bruk av en rekke importerte kommersielle testsystemer i IFA kan identifisere: antistoffer mot maur Egan EBV konvolutt antistoffer mot tidlig antigen av EBV, den samlede antistoff til et tidlig antigen av EBV, bestemt i den akutte fase av sykdommen og i kjernen og i cytoplasma, og den begrensede antistoffet EBV tidlig, bestemt i den akutte fase av sykdommen og i kjernen og i cellenes cytoplasma, avgrenset antistoffer mot EBV tidlig antigen, bestemt i midten av sykdommen bare i cytoplasma av celler og antistoffer mot EBV atom antigen. Bruken av disse testsystemene tillater differensial diagnose av en rekke sykdommer assosiert med EBV.

Etter positive ELISA for å identifisere antistoffer EBV gir immunoblot bekrefter reaksjon, som detekterer nærværet av antistoffer for å skille EBV markørproteiner (p-proteiner): P23, P54, P72 (tilstedeværelse av proteinet antyder muligheten for reproduksjon EBV), p 138. Said Over laboratoriemetoder brukes til å kontrollere effektiviteten av behandlingen.

Sensibiliteten til de virologiske metodene er 85-100%, spesifisiteten er 100%, studietiden er 2-5 dager. Ofte i praksis brukes metoden for direkte immunofluorescens (PIF) med polyklonale eller monoklonale antistoffer mot HSV-1 og HSV-2. UIF-metoden kan enkelt gjengis i et konvensjonelt klinisk laboratorium, det er ikke kostbart, følsomheten er over 80%, spesifisiteten er 90-95%. Ved immunfluorescerende mikroskopi viste nærvær av cytoplasmiske inneslutninger, morfologiske egenskaper, prosentandelen av infiserte celler i utstryk, skraper urethral, cervikalkanalen, cervix, rektum.

UIF-metoden gir en ide om de morfologiske egenskapene til celler og endringer i lokalisering av HSV antigener. I tillegg til direkte tegn på celleskader av herpesvirusene (deteksjon av spesifikk luminescens), er det indirekte tegn på herpesinfeksjon i henhold til UIF-dataene:

• aggregering av kjernefysiske stoffer, eksfoliering av karyolma;
• Tilstedeværelse av den såkalte. Kjerne "hull", når bare en karyolemma forblir fra kjernen av cellen;
• Tilstedeværelsen av intranukleære inneslutninger - Caudrys kalv.

Ved innstilling av UIF legen mottar ikke bare kvaliteten, men også en kvantitativ vurdering av de infiserte celler som vi har vært anvendt for å evaluere effektiviteten til antiviral behandling med acyclovir (AC). Dermed ble 80 pasienter med enkle kjønnsherpes (GG) undersøkt av UIF-metoden i dynamikk. Det er vist at hvis, før behandling med acyclovir i utstryk 88% av pasientene hadde en høy prosentandel av infiserte celler (50 til 75% og høyere), etter en kurs av acyclovir i utstryk 44% av pasientene med friske celler som detekteres i 31% av tilfellene er merket enkelt infiserte celler og 25% av pasientene hadde opptil 10% av infiserte celler.

Innholdet av infiserte celler i utstrykninger (PIF-reaksjon) hos pasienter med genital herpes, behandlet med acyklovir

Sykdomsperioder	Prosentandel i uttørking
	Infiserte celler					Normale celler
	Mer enn 75%	50-75%	40-50%	10%	Enkeltceller i n / sp
Tilbakeslag (før behandling)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisjon (etter behandling)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Ved å bruke mange års UIF og metoden for dot-hybridisering, sammenfalt nesten 100% av tilfellene med resultatene av studien. Det bør bemerkes at for å øke påliteligheten til diagnostisering av GH, særlig i tilfeller der det er subklinisk og malomanifestnyh former for herpes, er det anbefalt å bruke 2-3 metode for laboratorium diagnostisering, spesielt når undersøke gravide kvinner, kvinner med fødselshistorie vanskeligstilte, personer med uspesifisert gynekologisk diagnose.

Så, når PCR-diagnose av viralbakterielle infeksjoner i urogenitalkanalen, er det nødvendig å evaluere de positive resultatene som er oppnådd med hensyn til anamnese, tilstedeværelsen (eller fraværet) av spesifikke kliniske symptomer på sykdommen. Hvis klamydia oppdages med PCR, så er det i dette tilfellet mulig å snakke om infeksjon og løse problemene med terapi tilsvarende. Ved detektering av mykoplasmer (ureaplasmer), som er opportunistiske mikroorganismer, er det nødvendig med ytterligere kulturtest for å bekrefte diagnosen, det vil si sådd av materialet fra pasienten til følsomme cellekulturer. Først når positive resultater er oppnådd i kulturanalysen, kan vi snakke om laboratoriebekreftelse av diagnosen mycoplasmosis. Den samme metoden vil muliggjøre om nødvendig å bestemme sensitiviteten til de isolerte mykoplasmaene til ofte brukte medisinske former (antibiotika, fluorokinoloner, etc.).

Kanskje en en-trinns infeksjon med flere virus av familien Nepresviridae. Ofte oppdaget vi infeksjon av en pasient med HSV-1, HSV-2 og CMV-virus. Oftere infisert med flere herpesvirus var pasienter med kliniske og laboratorie manifestasjoner av sekundær IDS (pasienter med onkologisk, onkologisk, HIV-infisert). Det er således vist at kliniske og immunologiske forstyrrelser som utvikler seg ved HIV-infeksjon, ledsages av en økning i antall herpesviruser som oppdages ved molekylær hybridiseringsmetode. I denne prognostisk mest signifikante kan betraktes som en kompleks en-trinns deteksjon av DNA av HSV-1, CMV og HHV-6 type.

[1], [2], [3]