Konfokal mikroskopi

Konfokalmikroskopi regnes for tiden som en av de mest lovende metodene for in vivo hudavbildning, og det er derfor interessen for den er uvanlig høy blant både klinikere og representanter for forskningsinstitutter.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Konfokalmikroskopifunksjoner

I dermatologi brukes konfokal lasermikroskopi til:

• studie av penetrering av forbindelser inn i huden (penetrasjonsveier, kinetikk, fordeling i huden);
• observasjon av kjertlenes funksjon (bestemmelse av aktiv og passiv tilstand);
• studier av mikrosirkulasjonssystemet (inkludert i sanntid);
• diagnostikk av neoplasmer.

Uten å diskutere fordeler og ulemper ved de ovennevnte typene konfokalmikroskopi, bemerker vi at fluorescenslaser-konfokalmikroskopi har blitt stadig mer populært de siste årene.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Konfokalmikroskopi for hudundersøkelse

Konfokalmikroskopet gir to uvurderlige muligheter – studiet av vev på cellenivå i en tilstand av fysiologisk vital aktivitet og demonstrasjonen av resultatene av studien (dvs. cellulær aktivitet) i fire dimensjoner – høyde, bredde, dybde og tid. For bildekvaliteten og studiens dybde spilles den viktigste rollen av vevets evne til å overføre lys, med andre ord dets gjennomsiktighet. Konfokalmikroskopimetoden er kontaktløs, lysstrålen forårsaker ingen skade eller ubehag for pasienten som undersøkes eller forsøksdyret.

Konfokal skanningslasermikroskopi (CSLM) brukes til å undersøke huden. Metoden lar en se epidermis og papillærlaget i dermis med en oppløsning nær histologisk. Alle undersøkelsesresultater vises på skjermen og lagres som en pakke med bildefiler (som mikrofilm (i dynamikk) eller mikrofotografier).

Det finnes to typer av metoden:

• reflekterende (refleksjon CSLM) - basert på det faktum at ulike intracellulære og intercellulære strukturer har forskjellige brytningsindekser for lys, noe som gjør det mulig å oppnå et kontrastbilde.
• fluorescens (fluorescens CSLM) - bruker laserlys som trenger inn i huden og eksiterer ekso- eller endokromoforer i den, som som svar begynner å sende ut fotoner (dvs. fluorescere).

Lateral oppløsning er minimumsavstanden mellom punkter som ligger på et horisontalt plan, dvs. et plan parallelt med hudoverflaten. Aksial oppløsning er minimumsavstanden mellom punkter som ligger på et plan vinkelrett på hudoverflaten.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Historien om konfokalmikroskopi

Ideen om å lage et mikroskop som kan vise et snitt av levende vev på cellenivå ble aktivt utviklet for 130 år siden. Hovedelementet i moderne mikroskoper ble designet på slutten av 1800-tallet og var en roterende skive med små hull arrangert i en spiral. Denne skiven ble oppfunnet i 1883 av den tyske studenten Paul Nipkow, som den ble oppkalt etter - Nipkow-skiven (eller Nipkow-disken). Oppfinnelsen var basert på lysets evne, som passerer gjennom små hull i skiven og et forstørrelsesglass, til å trenge dypt inn i vevet og belyse et cellefragment på avstand fra overflaten. Når skiven roterer raskt, danner fragmentene et enkelt bilde. Ved å flytte strukturen bort fra eller nærmere objektet, er det mulig å variere dybden på den optiske seksjonen av vevet som studeres.

Det var først med fremveksten av videoopptakere på 1980-tallet og datamaskiner som kunne behandle bilder på begynnelsen av 1990-tallet at det ble mulig å lage og effektivt bruke de moderne mikroskopene som brukes i dag.